EPI400電擊感受態(tài)細(xì)胞是高品質(zhì)的克隆與表達(dá)產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于生化實(shí)驗(yàn)研究等領(lǐng)域，EPI400電擊感受態(tài)細(xì)胞是我司眾多優(yōu)質(zhì)克隆與表達(dá)之一，質(zhì)量堪比同類(lèi)進(jìn)口產(chǎn)品，價(jià)格非常優(yōu)惠，目前正熱烈促銷(xiāo)中，恭候您的咨詢(xún)訂購(gòu)。...

特別提示：包括EPI400電擊感受態(tài)細(xì)胞在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱(chēng)：EPI400電擊感受態(tài)細(xì)胞
英文名稱(chēng)：EPI400 Electroporation-Competent Cell
產(chǎn)品貨號(hào)：MQ0035
產(chǎn)品規(guī)格：5×50μl/20×50μl

EPI400電擊感受態(tài)細(xì)胞只能用于電擊轉(zhuǎn)化，不能用于熱激轉(zhuǎn)化。該菌株來(lái)源于EC100菌株，將EC100核基因中控制質(zhì)?？截悢?shù)的pcnB基因刪除后引入一個(gè)誘導(dǎo)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的pcnB基因，即是EPI400菌株。EPI400菌株可以降低質(zhì)粒的拷貝數(shù)，特別適合于各種不穩(wěn)定DNA或毒性基因的克隆，在加入誘導(dǎo)劑 CopyCutter Induction Solution后又可以提高質(zhì)粒產(chǎn)量到正常狀態(tài)。[mcrA，Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型使EPI400菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。lacZΔM15標(biāo)記的存在使DH10B可用于藍(lán)白斑篩選，tonA賦予其抗噬菌體T1和T5的能力，rpsL賦予其鏈霉素抗性。
EPI400電擊感受態(tài)細(xì)胞適用于不穩(wěn)定DNA或毒性基因的克隆，經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>1010 cfu/μg DNA。
保存條件：-80℃
基因型：
F-mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara，leu)7697 galU galK λ-rpsL(StrR)nupG trfA tonA pcnB4 dhfr
操作說(shuō)明：
1.0.1cm電擊杯和杯蓋從儲(chǔ)存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分揮發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實(shí)冰面，電杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分降溫。
2.取-80℃保存的EPI400電擊感受態(tài)細(xì)胞插入冰中5分鐘，待其融化，加入目的DNA(質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物)并用手撥打EP管底輕輕混勻，避免產(chǎn)生氣泡，立即插入冰中。
A.測(cè)定轉(zhuǎn)化效率使用1 μl 10 pg/μl的對(duì)照質(zhì)粒pUC19；
B.對(duì)于連接產(chǎn)物，請(qǐng)用乙醇沉淀DNA后加入適量TE緩沖液(10mM Tris HCl，pH7.5;1mM EDTA)重懸，DNA濃度不超過(guò)100ng/μl，體積不超過(guò)5μl/50μl感受態(tài)。
3.用200 μl槍頭將感受態(tài)-DNA混合物快速移到電擊杯中，避免產(chǎn)生氣泡，蓋上杯蓋。
4.啟動(dòng)電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV(此為BioRad電轉(zhuǎn)儀推薦參數(shù)，也可按所用電轉(zhuǎn)儀推薦的參數(shù)操作)，將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中，電擊完成快速插入冰中。
5.2分鐘后從冰中取出電擊杯，放室溫，加入700μl不含抗生素的無(wú)菌S.O.C.培養(yǎng)基(室溫)，用1ml槍吹吸電擊杯底部數(shù)次混勻后，轉(zhuǎn)移到50ml離心管(BD Falcon50ml錐形離心管等)，向離心管中補(bǔ)加S.O.C.培養(yǎng)基至5ml。37℃，225 rpm復(fù)蘇60分鐘。
6.5000rpm離心一分鐘收菌，重懸后取100-200 μl涂布到含相應(yīng)抗生素的S.O.C平板上(因菌量較大，若全部涂板請(qǐng)選用直徑15cm培養(yǎng)皿2-5個(gè))。將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)13-17小時(shí)。
注意事項(xiàng)：
1.加入DNA時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10。
2.電擊感受態(tài)細(xì)胞加入電擊杯應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡，氣泡會(huì)增加弧光放電風(fēng)險(xiǎn)。
3.當(dāng)DNA不純或存在鹽，乙醇，蛋白及緩沖液等污染時(shí)，轉(zhuǎn)化效率急劇下降。
4.電擊杯里的離子可增加溶液的電導(dǎo)，增大在含有細(xì)胞和DNA的溶液中產(chǎn)生電流和弧光放電的風(fēng)險(xiǎn)。
5.若轉(zhuǎn)化大質(zhì)?；蛳氆@得較高轉(zhuǎn)化效率，推薦使用高純質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒。質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。
6.對(duì)于連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化，zuì好轉(zhuǎn)化前乙醇沉淀DNA后用適量TE緩沖液(10 mM Tris HCl，pH7.5;1 mM EDTA)重懸產(chǎn)物，保證 DNA濃度不超過(guò)100 ng/μl。過(guò)高濃度連接產(chǎn)物或過(guò)大體積連接產(chǎn)物會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率，增加弧光放電的風(fēng)險(xiǎn)。
7.混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作，吸取感受態(tài)細(xì)胞時(shí)不可用孔徑過(guò)小的槍頭(普通 200μl槍頭應(yīng)剪去槍頭尖 0.6cm)避免用力過(guò)猛，以免剪切力過(guò)大損傷細(xì)胞膜，降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少zuì終用于涂板的菌量。
8.電擊感受態(tài)細(xì)胞zuì好保存在-80℃以下，高于-80℃超期儲(chǔ)存會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率會(huì)下降。

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貨號(hào)	名稱(chēng)	規(guī)格
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MQ0044	pression/MQ0044.html" target="_blank">Rosetta-gami(DE3)pLysS化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞	10×100μl/50×100μl

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