植物總RNA提取試劑盒由專業(yè)試劑供應(yīng)商北京百奧萊博提供，用于生化實(shí)驗(yàn)研究等領(lǐng)域，植物總RNA提取試劑盒是我司眾多優(yōu)質(zhì)RNA提取純化之一，質(zhì)量堪比同類進(jìn)口產(chǎn)品，價(jià)格非常優(yōu)惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...

特別提示：包括植物總RNA提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：植物總RNA提取試劑盒
英文名稱：Total RNA Extraction Kit from Plant
產(chǎn)品貨號：WH0062
產(chǎn)品規(guī)格：50次

本試劑盒采用、專一結(jié)合核酸的離心吸附柱和獨(dú)特的緩沖系統(tǒng)，可從植物組織中快速提取總RNA，可同時(shí)處理大量不同樣品。30-40分鐘內(nèi)即可完成反應(yīng)，操作簡單，提取迅速，溶液毒性小，實(shí)驗(yàn)安全。提取的總RNA純度高，沒有蛋白和其他雜質(zhì)的污染。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
·針對植物材料獨(dú)特配置，操作更簡單、流程更優(yōu)化。
·配有的DNase Ⅰ，可有效去除DNA污染。
·配有CS過濾柱，可有效去除其它雜質(zhì)。
· RNA純度更高，無雜質(zhì)殘留，特別適合于對純度要求很高的下游實(shí)驗(yàn)。
·操作安全可靠，無需酚/氯fǎng抽提，無需氯化銫梯度離心，無需氯化鋰或乙醇沉淀。

下游應(yīng)用：
· RT-PCR
· Northern blot、Dot blot
· Real-time RT-PCR
·芯片分析
· polyA篩選、體外翻譯、RNase保護(hù)分析和分子克隆

RNA得率：

植物葉片（100mg)	總RNA量（μg)
擬南芥	~35
玉米	~25
西紅柿	~65
煙草	~60

試劑盒組成：

組分	50T
裂解液RL	30ml
去蛋白液RW	140ml
漂洗液RW	12ml
RNase-Free ddH2O（瓶裝)	15ml
RNase-Free吸附柱CR3（含2ml收集管)	50套
RNase-Free過濾柱CS（含2ml收集管)	50套
DNase I	1500U
緩沖液RDD	4ml
RNase-Free ddH2O（管裝)	1ml
RNase-Free離心管（1.5ml)	50個(gè)

儲存條件：室溫（15-25℃)保存。RNase-Free DNase I,緩沖液RDD和RNase-Free ddH2O（管裝)置于2-8℃保存；加入β-巰基乙醇的裂解液RL 4℃可放置一個(gè)月。

預(yù)防RNase污染，應(yīng)注意以下幾方面：
1．經(jīng)常更換新手套。因?yàn)槠つw經(jīng)常帶有細(xì)菌，可能導(dǎo)致RNase污染。
2．使用無RNase的塑料制品和槍頭避免交叉污染。
3．RNA在裂解液RL中時(shí)不會被RNase降解。但提取后繼續(xù)處理過程中應(yīng)使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水徹底清洗，再滅菌，即可去除RNase。
4．配制溶液應(yīng)使用無RNase的水。（將水加入到干凈的玻璃瓶中，加入DEPC至終濃度0.1%（V/V)，放置過夜，高壓滅菌。）

使用前注意事項(xiàng)：
1．操作前在RL中加入β-巰基乙醇至終濃度1%，如1ml RL中加入10μl β-巰基乙醇。此裂解液zuì好現(xiàn)用現(xiàn)配。配好的RL 4℃可放置一個(gè)月，裂解液RL在儲存時(shí)可能會形成沉淀，如果有沉淀出現(xiàn)，請加熱溶解后使用。
2．植物組織裂解是否充分直接影響到RNA提取的質(zhì)量和產(chǎn)量，本試劑盒中提供的裂解液RL，主要成分為異硫氰酸胍，適用于大多數(shù)植物組織的裂解，但有些植物組織（例如玉米的乳白色胚乳）或絲狀真菌，由于次級代謝產(chǎn)物較特殊，異硫氰酸胍使樣品產(chǎn)生沉淀，導(dǎo)致RNA提取效果不佳的現(xiàn)象，購買試劑盒時(shí)可聯(lián)系我司業(yè)務(wù)員更換另一種裂解液HL，將解決該問題。
3．次使用前應(yīng)在漂洗液RW中加入無水乙醇，加入量請參見瓶上標(biāo)簽。
4．以下操作如非指明，均在室溫下進(jìn)行。

DNase I儲存液的配制：
將DNase I干粉（1500U）溶解在550 μl RNase-Free ddH2O中，輕柔混勻，分裝后-20℃貯存（可保存9個(gè)月）。
注意：從-20℃融化后的DNase I儲存液保存于4℃（可保存6周），不要再次凍存。

操作步驟：
1．勻漿處理：
  50-100mg植物葉片在液氮中迅速研磨成粉末，加入450 μl RL（使用前請先檢查是否已加入β-巰基乙醇），渦旋劇烈震蕩混勻。
  注意1：在56℃孵育1-3 min將有助于植物組織裂解，但是對于某些富含淀粉的樣品，請不要加熱處理，防止因淀粉引起的樣品膨脹現(xiàn)象。
  注意2：由于植物多樣性非常豐富，而且同種植物的不同生長發(fā)育階段和不同組織的RNA含量都不相同，請根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)情況選擇合適的植物材料的用量。
2．將所有溶液轉(zhuǎn)移至過濾柱CS上（過濾柱CS放在收集管中)，12000rpm（~13400×g)離心2-5 min，小心吸取收集管中的上清至RNase-Free的離心管中，吸頭盡量避免接觸收集管中的細(xì)胞碎片沉淀。
  注意：由于裂解液較粘稠，所以將溶液轉(zhuǎn)移至過濾柱時(shí)，可以剪去部分吸頭末端。
3．緩慢加入0.5倍上清體積的無水乙醇（通常為225 μl），混勻（此時(shí)可能會出現(xiàn)沉淀），將得到的溶液和沉淀一起轉(zhuǎn)入吸附柱CR3中，12000rpm（~13400×g)離心30-60 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CR3放回收集管中。
  注意：如果上清液體積有損失，請相應(yīng)調(diào)整乙醇的加量。
4．向吸附柱CR3中加入350 μl去蛋白液RW1，12000rpm（~13400×g)離心30-60 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CR3放回收集管中。
5．DNase I工作液的配制：取10μl DNase I儲存液放入新的RNase-Free離心管中，加入70 μl RDD溶液，輕柔混勻。
6．向吸附柱CR3中央加入80 μl的DNase I工作液，室溫放置15 min。
7．向吸附柱CR3中加入350 μl去蛋白液RW1，12000rpm（~13400×g)離心30-60 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CR3放回收集管中。
8．向吸附柱CR3中加入500 μl漂洗液RW （使用前請先檢查是否已加入乙醇），室溫靜置2 min，12000rpm（~13400×g)離心30-60 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CR3放回收集管中。
9．重復(fù)步驟8。
10．12000rpm（~13400×g)離心2 min，倒掉廢液。將吸附柱CR3置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
  注意：此步驟目的是將吸附柱CR3中殘余的漂洗液去除，漂洗液的殘留，可能會影響后續(xù)的RT等實(shí)驗(yàn)。
11．將吸附柱CR3放入一個(gè)新的RNase-Free離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加30-100 μl RNase-Free ddH2O，室溫放置2 min，12000rpm（~13400×g)離心2 min，得到RNA溶液。
  注意：洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于30 μl，體積過小影響回收效率。RNA樣品請?jiān)?70℃中保存。

RNA純度及濃度檢測：
完整性：RNA可用普通瓊脂糖凝膠電泳（電泳條件：膠濃度1.2%；0.5×TBE電泳緩沖液；150V，15 min)檢測完整性。由于細(xì)胞中70%-80%的RNA為rRNA，電泳后UV下應(yīng)能看到非常明顯的rRNA條帶。28S rRNA的量約為18S rRNA的兩倍，說明RNA的完整性較好。
純度：OD₂₆₀/OD₂₈₀比值是衡量蛋白質(zhì)污染程度的指標(biāo)。高質(zhì)量的RNA，OD₂₆₀/OD₂₈₀讀數(shù)在1.8-2.1之間，比值為2.0是高質(zhì)量RNA的標(biāo)志。OD₂₆₀/OD₂₈₀讀數(shù)受測定所用溶液的pH值影響。同一個(gè)RNA樣品，假定在10mM Tris，pH7.5溶液中測出的OD₂₆₀/OD₂₈₀讀數(shù)1.8-2.1之間，在水溶液中所測讀數(shù)則可能在1.5-1.9之間，但這并不表示RNA不純。
濃度：取一定量的RNA提取物，用RNase-Free ddH2O稀釋n倍，用RNase-Free ddH2O將分光光度計(jì)調(diào)零，取稀釋液進(jìn)行OD₂₆₀,OD₂₈₀測定，按照以下公式進(jìn)行RNA濃度的計(jì)算：
  終濃度（ng/μl）= （OD₂₆₀)×（稀釋倍數(shù)n)×40

根據(jù)您的關(guān)注的植物總RNA提取試劑盒，植物總RNA提取試劑盒，WH0062，百奧萊博，，，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：



名稱：柱式真菌RNA提取試劑盒
貨號：BTN80804
規(guī)格：50次
本試劑盒是在本公司真菌RNA提取試劑盒(BTN60305)基礎(chǔ)上改進(jìn)的柱式產(chǎn)品，跟真菌RNA提取試劑盒相比，它具有下列特點(diǎn)：
1. 柱式操作，更加簡單快捷，整個(gè)過程只需要約30分鐘。
2. RNA 純度高，OD260/280一般都在2.0左右，可直接用于RT-PCR、Norther雜交、microarray hybridization、cDNA 合成等。
3. RNA產(chǎn)量高，一般在 20-70μg/mL 酵母培養(yǎng)物(約2.0 ×107個(gè)細(xì)胞)。
4. 非酶細(xì)胞破裂法，適用于各種形態(tài)和各個(gè)種屬的真菌及革蘭氏陽性細(xì)菌，包括 Candida albican、Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pombe 、 Pichia pastoris 、Bacillus subtilis、Staphylococcusaureus等。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	20ml
溶液B	25ml
溶液C	75ml
溶液D	25ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脫液	10ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 將50mg左右的干菌絲(或100mg左右的鮮菌絲、或適當(dāng)數(shù)量的真菌菌落)轉(zhuǎn)移到 1.5mL塑料離心管中。如果是液體真菌培養(yǎng)物，則直接將1-10mL液體真菌在 1.5mL塑料離心管中 12000～15000g離心 1分鐘，并棄盡液體培養(yǎng)基(可以分多次離心)。
2. 加入0.4mL溶液A 并充分吹打混勻。如果 A溶液存放時(shí)產(chǎn)生沉淀，請置于65℃融化，用前充分搖晃均勻。
3. 加入0.4mL溶液B，劇烈振蕩 30秒。
4. 65℃保溫 5分鐘。
5.室溫 12000～15000g離心 3～5分鐘，轉(zhuǎn)移上清到一干凈的1.5mL塑料離心管中。
6. 再加入0.1mL溶液B和0.1mL自備氯fǎng，振蕩混勻 30秒。
7.室溫 12000～15000g離心 3～5分鐘，轉(zhuǎn)移上清到一自備的、干凈的5mL塑料離心管中。
8. 加入相當(dāng)于上清 3倍體積的溶液C(約1.2-1.5mL)和1倍體積的溶液D(約0.4-0.5mL)，充分混勻。
9. 將混合液(約2.5mL)分 3-4次轉(zhuǎn) 移 到離 心 吸 附 柱中 。 每次13000-15000g室溫離心半分鐘，棄收集管中的穿透液。
10. 用 0.5mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，室溫離心半分鐘，棄收集管中的穿透液。
11.一次洗滌一般足夠去除雜質(zhì)。但如果樣品 OD260/280 比值不高，可以再用 0.5mL 通用洗柱液重復(fù)此步一次。
12.室溫離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的洗柱液會影響 RNA的使用。
13. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一自備的RNase-free 1.5mL塑料離心管中，加入30-100μL RNA 洗脫液。
14.室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的電泳檢測：
 如果需要做 Northern雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行 RNA電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA分子(BioTechniques，28：414 ，2000)。 如 果是簡 單 檢 測 ，可以使 用 TAE或SuperBuffer-2 DNA/RNA 兩用快速電泳液，但文獻(xiàn)報(bào)道必須使用變性上樣液(BioTechniques，9:558，1990)。普通 DNA上樣液不含變性劑，也沒經(jīng)過去 RNase處理，所以zuì好不要使用。 尤其需要注意的是不要使用 TBE進(jìn)行 RNA電泳，因?yàn)門BE 所含硼酸是研究多糖的經(jīng)典方法----硼酸絡(luò)合法中的關(guān)鍵成分，硼酸通過與RNA 核糖中的羥基發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)，形成 RNA分子內(nèi)或RNA分子間的絡(luò)合復(fù) 合物，使同樣長度的RNA 具有不同的泳動(dòng)速度，電泳條帶彌散，同時(shí)有大的RNA 絡(luò)合復(fù)合物遲留在加樣孔中(一般會誤以為是基因組 DNA污染)。RNA分子內(nèi)或RNA分子間的絡(luò)合物的形成的多少和比例又與硼酸與RNA的數(shù)量比例有關(guān)，而 RNA樣品中污染的其他多糖也會參與此反 應(yīng)，使硼酸對 RNA電泳的影響更復(fù)雜，所以TBE 對 RNA電泳的影響 沒有規(guī)律性和重復(fù)性。有的樣品可以使用有的又不行，zuì好是避免使用。
16. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：
 將5-10μL RNA 溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2之間)檢測其在 OD260的光吸收。通過光吸收可以得出 RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進(jìn)而計(jì)算出 RNA的產(chǎn)量(濃度 X 體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/細(xì)菌用量)。注意不要將RNA 稀釋在 DEPC 水中檢測 OD260和OD280，否則光吸收比在 TE中測得的低 10%-15%。
17. RNA 純度測定：
 無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，OD260/OD230一般在2.0-2.3 之間，如果低于或高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)或多糖的污染，但一般不影響 RT-PCR等反應(yīng)。蛋白質(zhì)污染可以通過酚/氯fǎng抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分別用我公司的DNA Scavenger和PS Scavenger 去除。測 OD時(shí) RNA 不能過度稀釋使 OD 讀數(shù)低于儀器的有效范圍。

疑難解答：
Q：為何從酵母中提取的總 RNA 有 3 條小帶？
A：它們分別是70bp左右的tRNA，120bp左右的5S RNA，160bp左右的5.8 S RNA。
Q：上樣孔里的紅色熒光物一定是污染的基因組 DNA嗎？
A：不是。用 TAE或TBE電泳液和非變性膠電泳 RNA時(shí)容易產(chǎn)生此現(xiàn)象，百奧萊博初步研究發(fā)現(xiàn)大部分紅色熒光物是變性不充分的單鏈RNA 通過堿基互補(bǔ)或通過硼酸絡(luò)合(如果使用 TBE作電泳液的話)形成的復(fù)合物加 RNase處理后，這些紅色熒光物一般會消失。為避免此現(xiàn)象，建議zuì好使用甲醛變性膠電泳。如果需要使用非變性膠，也必須在上樣前使 RNA變性。使用百奧萊博優(yōu)化的上樣/變性/染色三用溶液 RNAload可以使 RNA在非變性膠上電泳時(shí)也有較好分辨率。使用非變性膠時(shí)，可以使用 TAE或超快電泳液 SuperBuffer-2，zuì好不要使用 TBE緩沖液，因?yàn)門BE中的硼酸能與RNA的多羥基形成復(fù)合物，RNA 很難形成銳利的條帶。
Q：如何確認(rèn)和去處除污染的基因組 DNA？
A：如果懷疑有 DNA污染，可以用 RNase處理 RNA樣品，然后再電泳。如果上樣孔里的紅色熒光物不消失，則表示是基因組 DNA污染。進(jìn)一步確認(rèn)可以使用 PCR擴(kuò)增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA 去除劑DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有殘留的RNase污染，所以必須嚴(yán)格按照廠家提供的使用手冊進(jìn)行操作。

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