高脂肪樣本蛋白提取試劑盒適用于從各種脂肪含量高的細(xì)胞和實(shí)體組織，如脂肪細(xì)胞、脂肪肝細(xì)胞、腦、脂肪、脂肪肝臟、結(jié)締組織、胸腺組織等動(dòng)物組織中提取總蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。...

高脂肪樣本蛋白提取試劑盒

 

產(chǎn)品編號(hào)：HR0119

產(chǎn)品組成：

儲(chǔ)存條件：

蛋白提取液2-8℃保存；離心柱室溫保存；蛋白酶抑制劑-20℃保存。有效期1年。

【注】：

● 蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

● 蛋白酶抑制劑在2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

高脂肪樣本蛋白提取試劑盒適用于從各種脂肪含量高的細(xì)胞和實(shí)體組織，如脂肪細(xì)胞、脂肪肝細(xì)胞、腦、脂肪、脂肪肝臟、結(jié)締組織、胸腺組織等動(dòng)物組織中提取總蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。

本試劑盒含有的獨(dú)特配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份，包括細(xì)胞質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫共沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白，下游應(yīng)用范圍廣，提取液裂解細(xì)胞的能力較溫和，需要根據(jù)實(shí)際樣本情況優(yōu)化裂解時(shí)間。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳，如下游實(shí)驗(yàn)需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請(qǐng)使用我公司其他貨號(hào)的試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于2D電泳，用脫鹽柱脫鹽處理。

本試劑盒所配離心柱用來(lái)濾除顆粒較大的固體雜質(zhì)和固態(tài)脂肪雜質(zhì)，不能完全濾除液態(tài)脂滴，如果離心過(guò)濾后液面有脂肪層，需要用移液器移除液面的脂肪層。需要一次性完全濾除所有液態(tài)脂肪請(qǐng)選用我公司其他貨號(hào)的試劑盒。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

● 使用方便，從細(xì)胞/組織提取蛋白不需經(jīng)過(guò)研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。

● 將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。

● 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

● 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

● 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含7 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 移液器 ● 離心機(jī) ● 渦旋混勻器 ● 振蕩器 ● PBS

高脂肪樣本蛋白提取試劑盒注意事項(xiàng)：

● 旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

● 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

● 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

● 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

● Western 實(shí)驗(yàn)內(nèi)參可以選用beta-actin、GAPDH、TubμLin。

使用方法：

細(xì)胞蛋白提?。?

1、提取液制備：

每500μL冷的蛋白提取液中加入2μL 蛋白酶抑制劑混合物混勻后置冰上備用。

【注】：

● 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加過(guò)蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

● 蛋白樣品用于測(cè)定某些細(xì)胞內(nèi)蛋白酶、磷酸酶活性等下游實(shí)驗(yàn)時(shí)，注意根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整抑制劑混合物是否加入。

2、取5-10×10⁶個(gè)細(xì)胞，在4℃，2000×g條件離心5-10分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。

3、用冷 PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4、每 5×10⁶個(gè)細(xì)胞中加入500μL冷的蛋白提取液，混勻后，在4℃條件下振蕩15-20分鐘。

【注】：

● 用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保持液體稍微晃動(dòng)即可。

● 沒(méi)有振蕩條件可以不振蕩，置4℃靜置即可，稍微延長(zhǎng)時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

5、套上液體收集管，將提取液吸入蛋白離心管中，在4℃，10000×g條件下離心5分鐘。

【注】：

● 蛋白離心管適用于過(guò)濾除去不溶性大顆粒組織固體雜質(zhì)，固態(tài)脂肪等，如果是做脂肪含量低的細(xì)胞或無(wú)明顯固體不溶物時(shí)，可以不使用離心柱，直接將勻漿液離心即可。

● 提取液液面有脂滴時(shí)，可以用移液器小心吸除脂滴即可。

● 蛋白液里的微量脂肪需要直接過(guò)濾除去，可以使用我們的蛋白去脂肪柱。

● 離心前蛋白液會(huì)在重力作用下自然流穿離心柱，一定要先套上收集管再吸入蛋白液。

6、將液體收集管中的液體吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到蛋白樣品。

7、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

● 建議用BCA法進(jìn)行蛋白定量。

● 蛋白樣品-80℃存放一年沒(méi)有問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

組織蛋白提取：

1、提取液制備：

每500μL蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】：

● 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加過(guò)蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

2、取100mg-200mg組織樣本剪碎，加入500μL蛋白提取液，用組織勻漿器/勻漿機(jī)充分勻漿。

【注】：

● 如果組織樣品很細(xì)小，可剪碎后直接加入提取液振蕩15分鐘，可以不用勻漿器。

● 也可用液氮研磨的方法，常用操作即可。

3、將組織勻漿吸入一預(yù)冷的干凈離心管中，在4℃條件下振蕩15-30分鐘。

【注】：

● 用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保持液體稍微晃動(dòng)即可。

● 沒(méi)有振蕩條件可以不振蕩，置4℃靜置即可，稍微延長(zhǎng)時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

4、套上液體收集管，將提取液吸入蛋白離心管中，在4℃，10000×g條件下離心5分鐘。

【注】：

● 蛋白離心管適用于過(guò)濾除去不溶性大顆粒組織固體雜質(zhì)，固態(tài)脂肪等，如果是做脂肪含量低的細(xì)胞或無(wú)明顯固體不溶物時(shí)，可以不使用離心柱，直接將勻漿液離心即可。

● 提取液液面有脂滴時(shí)，可以用移液器小心吸除脂滴即可。

● 蛋白液里的微量脂肪需要直接過(guò)濾除去，可以使用我們的蛋白去脂肪柱。

● 離心前蛋白液會(huì)在重力作用下自然流穿離心柱，一定要先套上收集管再吸入蛋白液。

5、將液體收集管中的液體吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，在4℃，10000×g條件下離心5分鐘。

6、將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到蛋白樣品。

7、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

● 建議用BCA法進(jìn)行蛋白定量。

● 蛋白樣品-80℃存放一年沒(méi)有問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

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