MTS溶液可以直接加入到細(xì)胞樣品中，不需要預(yù)配各種成分，MTS溶液很穩(wěn)定，對細(xì)胞沒有毒性，可以長時間孵育細(xì)胞。MTS法測定細(xì)胞增殖或毒性試驗中活細(xì)胞數(shù)目的靈敏度高，無放射性，檢測細(xì)胞增殖實驗的靈敏度比其它方法如MTT, XTT和WST-1高。...

MTS細(xì)胞增殖與毒性檢測試劑盒

 

產(chǎn)品編號：HR0489

產(chǎn)品組成：

儲存條件：

2-8℃避光保存。長期不用的分裝后于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。有效期1年。

使用限制：本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

MTS細(xì)胞增殖與毒性檢測試劑盒產(chǎn)品簡介：

本產(chǎn)品是應(yīng)用新型的水溶性甲臢化合物[3-（4，5-二甲基噻唑-2-基）-5-（3-羧甲酯基）-2-（4-磺苯基）-2H-四唑（金翁），內(nèi)鹽；MTS]快速高靈敏度檢測細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的比色檢測產(chǎn)品。

MTS被細(xì)胞生物還原成一種可溶于組織培養(yǎng)基的甲臢化合物，新陳代謝活躍的活細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶類將MTS轉(zhuǎn)化成液態(tài)可溶的甲臢化合物，這種甲臢化合物在490nm的吸收值可以直接在96 孔板上測量，而不需要另外作處理。由490nm測量的吸收值所表示的甲臢產(chǎn)物的數(shù)量與培養(yǎng)物中活性細(xì)胞的數(shù)量成正比。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)量呈線性關(guān)系。

MTS溶液可以直接加入到細(xì)胞樣品中，不需要預(yù)配各種成分，MTS溶液很穩(wěn)定，對細(xì)胞沒有毒性，可以長時間孵育細(xì)胞。MTS法測定細(xì)胞增殖或毒性試驗中活細(xì)胞數(shù)目的靈敏度高，無放射性，檢測細(xì)胞增殖實驗的靈敏度比其它方法如MTT, XTT和WST-1高。

產(chǎn)品特點：

● 易于使用：直接將MTS溶液，加入到細(xì)胞中，孵育然后讀取吸光度值。

● 快速：在96孔板中進(jìn)行檢測，不需洗滌或收獲細(xì)胞。也不需要溶解步驟。因為MTS甲臢產(chǎn)物可溶解在組織培養(yǎng)基中。

● 非放射性：不需液閃混合液，不需處理放射性廢物（不像[3H]-胸腺嘧啶）。

● 靈活：平板被讀數(shù)后還可以放回溫箱繼續(xù)顏色反應(yīng)（不像MTT）。

● 安全：不需要揮發(fā)性有機溶劑來溶解甲臢化合物（不像MTT）。

應(yīng)用：

● 細(xì)胞增殖；細(xì)胞毒性；凋亡結(jié)果 ● 化學(xué)靈敏性 ● 細(xì)胞貼附確定；趨化性

樣本類型：

● 懸浮細(xì)胞 ● 貼壁細(xì)胞

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 帶有450nm波長的酶標(biāo)儀/分光光度計 ● CO₂培養(yǎng)箱 ● 離心機 ● 移液器 ● 96孔培養(yǎng)板

● PBS緩沖液 ● HBSS

MTS細(xì)胞增殖與毒性檢測試劑盒使用注意事項：

● 需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融，否則將會增加空白吸收，從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

● 用培養(yǎng)基或PBS來配制待檢測藥物。

● 如果待測藥物有還原性，則測定不含細(xì)胞，僅含有MTS的待測藥物溶液在490nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入MTS,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的100μL培養(yǎng)基和10μL MTS進(jìn)行檢測。

● 細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

● 加MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實驗情況而定，對于大多數(shù)情況孵育1 小時即可，白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長時間。

● 如果不是使用96 孔板檢測，MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。

活性測定使用方法：

1、收集細(xì)胞，加細(xì)胞懸液100μL（約5000-10000個細(xì)胞）到96孔板（邊緣孔用無菌水或PBS填充）。每板設(shè)對照（加100μL培養(yǎng)基）。

2、置37℃，5% CO₂孵育過夜，倒置顯微鏡下觀察。

3、每孔加入10μL待檢測藥物溶液，37℃孵育。

【注】：

● 此處以藥物處理細(xì)胞為例，實際以自己的細(xì)胞樣品為準(zhǔn)。

● 用各種方法制備的細(xì)胞模型按下面方法加入MTS試劑后檢測即可。

4、每孔加入10μL MTS 溶液，37℃孵育1-4小時。

【注】：

● 此處以96孔板加樣為例，實際檢測時以自己的細(xì)胞培養(yǎng)容器為準(zhǔn)。

● 按培養(yǎng)基的用量的10%比例添加MTS試劑即可。

5、測定490nm各孔的吸光值。

6、同時設(shè)置空白孔（培養(yǎng)基和MTS溶液，無細(xì)胞），對照孔（不加藥培養(yǎng)基和MTS溶液，有細(xì)胞），每組設(shè)定3-5復(fù)孔。

【注】：

● 復(fù)孔數(shù)量根據(jù)自己實際需要設(shè)定，為了降低試劑消耗成本，可以少設(shè)復(fù)孔。

結(jié)果分析：

細(xì)胞活力計算：

將各測試孔的OD值減去調(diào)零孔OD值或?qū)φ湛譕D值。各重復(fù)孔的OD值取平均數(shù)。

細(xì)胞活力% =（加藥細(xì)胞OD-空白OD/對照細(xì)胞OD-空白OD）×100

數(shù)量測定使用方法：

1、先用細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。

2、按比例(例如：1/2 比例)依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細(xì)胞濃度梯度，一般要做3-5個細(xì)胞濃度梯度，每組3-6個復(fù)孔。

3、接種后培養(yǎng)2-4小時使細(xì)胞貼壁，然后加MTS試劑培養(yǎng)一定時間后測定OD值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)(X軸)，OD值為縱坐標(biāo)(Y軸)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量 (使用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提條件是實驗的條件要一致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入MTS后的培養(yǎng)時間)。

常見問題：

● 檢測時需要換液嗎？

如果待測藥物有還原性，需要換液，否則不需要。

● 如何判斷待測藥物是否含有還原性？

測定不含細(xì)胞，僅含有待測藥物的溶液加入MTS反應(yīng)后的在490nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，說明待測藥物沒有還原性或還原性很小，對MTS沒有影響，則可以不換液，在培養(yǎng)基中直接加入MTS；如果吸光度相對較大，說明藥物具有較強的還原性，則需要除去含藥物的培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的100μL培養(yǎng)基和10μL MTS進(jìn)行檢測。

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