細胞膜探針具有多種顏色可以選擇，可根據(jù)情況對樣品進行多色標記實驗。除了本試劑的綠色熒光探針，我公司還可以提供紅色、橙色、深紅色等顏色的染色試劑盒。以96孔板每孔200μL染色液計，本產(chǎn)品500μL可以染色1000-5000個樣本。...

細胞膜染色試劑DiO

 

產(chǎn)品編號：HR8623

產(chǎn)品組成：

儲存條件：

染料-20℃避光保存；避免反復凍融。有效期6個月。

【注】：

● 染料短期2周內可以2-8℃保存，長期不用可以-20℃保存，避免反復凍融。

● 染色液A為DMSO溶液，冬季氣溫較低時為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態(tài)后離心至管底部 再開蓋。

● 可以用手捂住使其融解或37℃短時間水浴，吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預熱，否則容易再次凝固在吸頭內產(chǎn)生損耗。

細胞膜染色試劑DiO產(chǎn)品簡介：

本試劑為綠色熒光標記的細胞膜探針，具有488/500nm的最大激發(fā)/發(fā)射波長。

當親脂性的綠色熒光探針DIOC16(3) PERCHLORATE 進入細胞膜后，在整個細胞膜上擴散，最佳濃度時可以使整個細胞膜染色。染色液DIOC16(3) PERCHLORATE 在進入細胞膜之前熒光非常弱，當與細胞膜結合后其熒光強度大大增強，被激發(fā)后可以發(fā)出綠色的熒光，具有很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。

本探針通常不會明顯影響細胞的活力，因此被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經(jīng)等細胞或組織的示蹤劑。除了最簡單的細胞膜熒光標記外，還可以用于檢測細胞的融合和粘附，檢測發(fā)育或移植過程中細胞遷移，通過FRAP檢測脂在細胞膜上的擴散，檢測細胞毒性和標記脂蛋白等。

細胞膜探針具有多種顏色可以選擇，可根據(jù)情況對樣品進行多色標記實驗。除了本試劑的綠色熒光探針，我公司還可以提供紅色、橙色、深紅色等顏色的染色試劑盒。

以96孔板每孔200μL染色液計，本產(chǎn)品500μL可以染色1000-5000個樣本。

檢測方法：

● 流式細胞儀 ● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦

樣本類型：

● 懸浮細胞 ● 貼壁細胞

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 激光共聚焦/熒光顯微鏡 ● 離心機 ● 移液器 ● PBS(pH7.4，10mM)或者HBSS(無酚紅)

使用注意事項：

● 螺旋蓋微量管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。

● DIOC16(3) PERCHLORATE染色液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時在室溫時為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預熱，否者容易再次凝固在吸頭內壁產(chǎn)生損耗。

● 使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進行簡短離心使DMSO溶液集中于管底。

● 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。

● 標記的條件因細胞種類而異，根據(jù)不同樣本的實際染色結果做相應調整，在每次實驗前，請先根據(jù)不同的實驗要求、細胞類型、細胞的膜通透性等進行優(yōu)化，確定最佳條件。以下方法僅供參考。

● 染色后立即進行分析。

● 本染色液可用于細胞涂片、細胞的檢測。

細胞膜染色試劑DiO使用方法：

一、染色工作液的配制：

1、根據(jù)樣本數(shù)量，用37℃培養(yǎng)箱預熱的HBSS將DIOC16(3) PERCHLORATE熒光染料400-2000倍稀釋，配制成染色工作液。

【注】：

● 也可以直接用相應的無血清培養(yǎng)基或其他緩沖液稀釋DIOC16(3) PERCHLORATE染料至所需濃度。

● 開始實驗前，使用無血清培養(yǎng)基或HBSS緩沖液稀釋染料儲存液到需要的工作濃度。工作濃度應根據(jù)不同細胞的預實驗結果確定的最佳工作濃度，建議至少在超過10倍范圍的濃度下進行測試。一般染色終濃度400-2000倍稀釋，1000-2000倍適合大多數(shù)細胞樣本。

● 建議收到產(chǎn)品后，根據(jù)單次使用量，對母液進行小量分裝，每次使用一管，試劑-20℃避光凍存，一年穩(wěn)定。

● 工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。

● 為了降低探針加載過度可能引起的假陽性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。

● 若細胞在染色后于不含染料的培養(yǎng)基中孵育，熒光信號會衰減。

二、細胞染色

A：懸浮細胞染色

1、用PBS洗滌細胞2次。

2、加入適量體積的染色工作液重懸細胞，使其密度大約為1×10⁶/mL。

3、在37℃孵育細胞5～20分鐘，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同?？梢杂?0分鐘作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記結果。

【注】：

● 若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間。

4、孵育結束，500×g離心5分鐘。

5、傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預熱的培養(yǎng)液重懸細胞。

6、重復（4），（5）步驟兩次以上

B：貼壁細胞染色

1、用PBS洗滌細胞2次。

2、細胞培養(yǎng)板中或細胞爬片上加入適量體積的染色工作液。

【注】：

● 96孔細胞培養(yǎng)板每孔加入100μL染色液即可。

3、37℃孵育細胞5～20分鐘，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同?？梢杂?0分鐘作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記結果。

【注】：

● 若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間。

4、吸干染色工作液，用培養(yǎng)液洗培養(yǎng)板或蓋玻片2～3次，每次用預熱的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞，孵育5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。

三、用熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測

最大激發(fā)波長為488nm，最大發(fā)射波長為500nm。

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