本產(chǎn)品中的CellROX Green本身熒光較弱，可自由透過活細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，并被細(xì)胞內(nèi)的ROS氧化，氧化產(chǎn)物可摻入染色體DNA中，熒光強(qiáng)度增大，產(chǎn)生明亮的綠色熒光。根據(jù)活細(xì)胞中綠色熒光的產(chǎn)生，可以判斷細(xì)胞ROS含量的多少和變化。用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可直接觀察，是一種快速簡便的組織或培養(yǎng)活細(xì)胞中ROS經(jīng)典檢測方法。...

ROS活性氧檢測試劑盒(cellRox Green)

 

產(chǎn)品編號(hào)：HR8786

產(chǎn)品組成：

保存條件：

-20℃避光保存。有效期6個(gè)月。

【注】：

● 探針長期不用可以-20℃保存，避免反復(fù)凍融，可以根據(jù)需要分裝后凍存。

● 染色液A為DMSO溶液，冬季氣溫較低時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

● 可以用手捂住使其融解或37℃短時(shí)間水浴。吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否則容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。

產(chǎn)品簡介：

活性氧(ROS)的產(chǎn)生主要是氧化磷酸化的結(jié)果，在呼吸鏈中，在某些位點(diǎn)會(huì)有“泄露”的電子直接和氧氣或和其他電子受體反應(yīng)，在酶或非酶作用下引發(fā)一系列反應(yīng)生成不同種類的活性氧：“泄露”的電子最初和氧氣反應(yīng)生成超氧陰離子自由基(O2·-)。超氧陰離子遇水生成H₂O₂，同時(shí)過氧化氫也可由氧氣在單胺氧化酶(MAO)的作用下生成，生成的過氧化氫在髓過氧化物酶(MPO)的催化下與Cl-反應(yīng)可生成ClO-，在鐵或銅離子的催化下發(fā)生Fenton反應(yīng)生成OH·，超氧陰離子遇氮氧化物反應(yīng)生成ONOO-。這些生成的高氧化活性的物質(zhì)統(tǒng)稱為活性氧。

本產(chǎn)品中的CellROX Green本身熒光較弱，可自由透過活細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，并被細(xì)胞內(nèi)的ROS氧化，氧化產(chǎn)物可摻入染色體DNA中，熒光強(qiáng)度增大，產(chǎn)生明亮的綠色熒光。根據(jù)活細(xì)胞中綠色熒光的產(chǎn)生，可以判斷細(xì)胞ROS含量的多少和變化。用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可直接觀察，是一種快速簡便的組織或培養(yǎng)活細(xì)胞中ROS經(jīng)典檢測方法。在激發(fā)波長488nm，發(fā)射波長520nm附近，使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞儀等檢測熒光，從而測定細(xì)胞內(nèi)活性氧水平。

ROS活性氧檢測試劑盒(cellRox Green)產(chǎn)品特點(diǎn)：

● 使用方便：可用激光共聚焦顯微鏡直接觀察、熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測；

● 背景低，靈敏度高；

● 線性范圍寬，使用方便。

檢測方法：

● 流式細(xì)胞儀 ● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦 ● 熒光酶標(biāo)儀 ● 熒光光度計(jì)

樣本類型：

● 懸浮細(xì)胞 ● 貼壁細(xì)胞

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 激光共聚焦顯微鏡或熒光分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀，激發(fā)波長488nm，發(fā)射波長520nm。

● 離心機(jī) ● 移液器 ● PBS緩沖液 ● 或者HBSS（無酚紅） ● 黑色96孔板

使用注意事項(xiàng)：

● 螺旋蓋微量管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。

● 熒光探針標(biāo)記后，一定要洗凈殘余的未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的探針，否則會(huì)導(dǎo)致背景較高。

● 探針標(biāo)記完畢并洗凈殘余探針后，可以進(jìn)行激發(fā)波長的掃描和發(fā)射波長的掃描，以確認(rèn)探針的標(biāo)記情況是否正常。

● 盡量縮短探針標(biāo)記后到測定所用的時(shí)間，以減少各種可能的誤差。

● CellROX Green在光照和空氣中易被氧化，注意避光密閉保存。

● 對(duì)不同的細(xì)胞和組織，應(yīng)選擇合適的孵育時(shí)間和濃度，以觀察ROS的變化，很多細(xì)胞內(nèi)的ROS絕對(duì)水平較低，需要根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)延長孵育時(shí)間。

● CellROX Green探針可以根據(jù)需要的用量分裝后凍存，避免反復(fù)凍融。

● CellROX Green不可以一次性全部稀釋后長期保存不用，稀釋后穩(wěn)定性變差，有效期縮短。

● 標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類而異，根據(jù)不同樣本的實(shí)際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整，在每次實(shí)驗(yàn)前，請(qǐng)先根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)要求、細(xì)胞類型、細(xì)胞的膜通透性等進(jìn)行優(yōu)化，確定最佳條件。以下方法僅供參考。

● 原位檢測必須使用熒光檢測專用的黑色透明底96孔細(xì)胞培養(yǎng)板。

使用方法：

CellROX Green探針配制：

根據(jù)需要用量，用新鮮無酚紅無血清培養(yǎng)基或HBSS稀釋CellROX Green探針后充分混勻，避光保存?zhèn)溆谩?

2、探針使用終濃度200-1000倍稀釋。一般預(yù)實(shí)驗(yàn)起始濃度按500倍即可。

【注】：

● 不能用含有血清的培養(yǎng)基稀釋探針。

● 也可以用HBSS緩沖液或PBS稀釋探針。

● 如果熒光太強(qiáng)，超過儀器的檢測范圍，可以按照1:1000-5000稀釋探針。

CellROX Green探針標(biāo)記：

1、CellROX Green溶液可在新鮮無血清培養(yǎng)基、HBSS緩沖液或組織灌流液中稀釋到所需濃度，終濃度200-1000倍稀釋，以此染色液更換細(xì)胞培養(yǎng)基或灌流液；也可直接向無血清細(xì)胞孵育液體或灌流液中加入CellROX Green探針溶液至所需濃度。

【注】：

● 檢測貼壁細(xì)胞時(shí)，熒光顯微鏡檢測可以原位染色也可以消化下來后染色，流式檢測消化下來后染色。

2、依據(jù)細(xì)胞ROS含量的不同，CellROX Green終濃度可選擇在200-1000倍稀釋的范圍，孵育時(shí)間可選擇30分鐘-4小時(shí)，在37℃或室溫進(jìn)行避光孵育。

【注】：

● 如果熒光太強(qiáng)，超過儀器的檢測范圍，可以按照1:1000-5000稀釋探針。

3、孵育結(jié)束后，用PBS等新鮮緩沖液清洗細(xì)胞或組織。漂洗時(shí)間要短。

【注】：

● 也可以用HBSS/PBS洗滌細(xì)胞。

ROS活性氧檢測試劑盒(cellRox Green)熒光顯微鏡觀察：

1、對(duì)貼壁生長細(xì)胞或活組織，可直接在熒光顯微鏡下觀察；對(duì)懸浮生長細(xì)胞，取25-50μL細(xì)胞懸液滴到一張顯微載玻片上，再蓋上一張蓋玻片。

2、熒光顯微鏡下觀察。

流式細(xì)胞儀分析：

1、染色并洗滌細(xì)胞后用0.5～1 mL冷PBS重懸細(xì)胞（5～10萬）。

2、采用488nm波長激發(fā)，發(fā)射波長520 nm，測定待測細(xì)胞平均熒光強(qiáng)度。

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