AlamarBlue的無(wú)毒特性使細(xì)菌可長(zhǎng)期暴露于這種染料,因此可隨時(shí)間進(jìn)行測(cè)量或進(jìn)行終點(diǎn)測(cè)量。由于AlamarBlue對(duì)細(xì)菌無(wú)毒、無(wú)害,不影響細(xì)菌的合成與分泌等活性,因此可以對(duì)同一批細(xì)菌的增生狀態(tài)進(jìn)行連續(xù)觀察和進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)觀察,因此有操作簡(jiǎn)便和幾乎不干擾細(xì)菌正常代謝的特點(diǎn)。...

細(xì)菌活性檢測(cè)試劑盒-AlamarBlue

 

產(chǎn)品編號(hào)：HR0506

產(chǎn)品組成：

儲(chǔ)存條件：

2-8℃避光保存。有效期1年。

【注】：

● Alamar Blue存放于2-8℃,長(zhǎng)期不用請(qǐng)分裝后-20℃避光保存。

● 避免反復(fù)凍融。多次凍融會(huì)導(dǎo)致失效。

● 凍存后溶解時(shí)注意重新混勻。

● 試劑拆封會(huì)請(qǐng)盡快使用完！

細(xì)菌活性檢測(cè)試劑盒-AlamarBlue產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本試劑盒是應(yīng)用新型的氧化還原指示劑阿爾瑪藍(lán)快速高靈敏度檢測(cè)細(xì)菌活性的比色檢測(cè)產(chǎn)品。

AlamarBlue是一種氧化還原指示劑,能根據(jù)代謝活性產(chǎn)生吸光度變化和熒光信號(hào)。其在氧化狀態(tài)下呈現(xiàn)紫藍(lán)色無(wú)熒光性,而在還原狀態(tài)下,轉(zhuǎn)變?yōu)槌史奂t或紅色熒光的還原產(chǎn)物,其吸收峰為530-560nm,而散射峰為590nm。在細(xì)菌增殖過(guò)程中,體內(nèi)NADPH/NADP、FADH/FAD、 FMNH/FMN 和NADH/NAD 的比值升高,處于還原環(huán)境。攝入菌體內(nèi)的染料被這些代謝中間體還原后釋放到體外并溶于培養(yǎng)基中,使培養(yǎng)基從無(wú)熒光的靛青藍(lán)變成有熒光的粉紅色。最后用普通分光光度計(jì)或熒光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè),吸光度和熒光強(qiáng)度與活性細(xì)菌數(shù)成正比。這種染料經(jīng)過(guò)驗(yàn)證安全無(wú)毒,用于細(xì)菌活性和細(xì)菌增殖的定量分析。

AlamarBlue的無(wú)毒特性使細(xì)菌可長(zhǎng)期暴露于這種染料,因此可隨時(shí)間進(jìn)行測(cè)量或進(jìn)行終點(diǎn)測(cè)量。由于AlamarBlue對(duì)細(xì)菌無(wú)毒、無(wú)害,不影響細(xì)菌的合成與分泌等活性,因此可以對(duì)同一批細(xì)菌的增生狀態(tài)進(jìn)行連續(xù)觀察和進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)觀察,因此有操作簡(jiǎn)便和幾乎不干擾細(xì)菌正常代謝的特點(diǎn)。

檢測(cè)方法：

● 在530-560nm激發(fā),在590nm發(fā)射熒光

● 在570nm和600nm用分光光度計(jì)測(cè)定光吸收

產(chǎn)品特點(diǎn)：

● 使用方便：僅使用單一試劑；

● 對(duì)微生物細(xì)胞進(jìn)行靈敏、無(wú)毒且安全的細(xì)胞活力和增殖測(cè)定；

● 能長(zhǎng)期使用,持續(xù)進(jìn)行測(cè)定而不損傷細(xì)菌或產(chǎn)生有毒廢物；

● 靈活、簡(jiǎn)便- 能與多種儀器平臺(tái)、96和384孔板以及熒光或分光光度法測(cè)定兼容；

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 酶標(biāo)儀或分光光度計(jì) ● 離心機(jī) ● 移液器 ● 純水 ● PBS/HBSS(無(wú)酚紅) ● 96孔培養(yǎng)板

使用注意事項(xiàng)：

● 合適密度的細(xì)菌可以增加檢測(cè)靈敏度。

● 注意接種細(xì)菌濃度和加入檢測(cè)試劑后孵育時(shí)間。細(xì)菌濃度過(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng),會(huì)導(dǎo)致繼發(fā)性還原反應(yīng),產(chǎn)生無(wú)色和熒光消失。

● 孵育時(shí),需避光。

● 本產(chǎn)品可以使用熒光或分光光度檢測(cè),但熒光的靈敏度高,實(shí)驗(yàn)誤差小,推薦使用熒光檢測(cè)。

● 需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

● 正式實(shí)驗(yàn)前,建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索接種細(xì)菌的數(shù)量和加入Alamar Blue試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。

細(xì)菌活性檢測(cè)試劑盒-AlamarBlue使用方法：

細(xì)菌的活性實(shí)驗(yàn),一般可在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中進(jìn)行,下面以96孔板檢測(cè)為例,如果使用其他培養(yǎng)方法,AlamarBlue試劑加入培養(yǎng)液用量的10%即可。

1、每孔加入100μL細(xì)胞懸液。細(xì)胞的數(shù)量取決于實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮团囵B(yǎng)時(shí)間。具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等因素確定。

2、接種的細(xì)胞按照實(shí)驗(yàn)需要,送入培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。

3、培養(yǎng)結(jié)束后,取出AlamarBlue試劑,置室溫融化混勻,于潔凈工作臺(tái)內(nèi)按10μl/孔加入微孔板中,在培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育12-24小時(shí),培養(yǎng)液顏色由藍(lán)變?yōu)榉奂t（如采用熒光分光光度法,只需孵育2-8小時(shí)）；

【注】：

● 檢測(cè)靈敏度隨著溫育時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，細(xì)胞數(shù)量少的樣品應(yīng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間至24h。細(xì)胞濃度過(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，會(huì)導(dǎo)致繼發(fā)性還原反應(yīng)，產(chǎn)生無(wú)色和熒光消失。溫育時(shí)間要摸索。

4、在570nm測(cè)定吸光度,參考波長(zhǎng)600nm。如無(wú)此濾光片,可用565nm和 610nm的濾光片替代。

【注】：

● 數(shù)據(jù)處理時(shí)用A570減去A600.

5、也可用熒光分光光度法檢測(cè),激發(fā)光波長(zhǎng)560nm（在530-560nm之間均可）,發(fā)射光波長(zhǎng)為590nm。

【注】：

● 熒光檢測(cè)更為靈敏，無(wú)法檢測(cè)熒光時(shí)測(cè)定吸光度。

● 測(cè)定板或試管可用鋁箔紙包裹，并保存在4℃，然后在1-3天之內(nèi)檢測(cè)而不會(huì)影響熒光或吸光度值。

● （可選）可以直接添加反應(yīng)終止液到100μL的細(xì)胞中可終止細(xì)胞活力試劑反應(yīng)。

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