本試劑盒按每個樣本處理2mL乳汁/唾液計(jì)，每個50T試劑盒大約可以用于提取100mL乳汁/唾液。如果需要處理大量的乳汁/唾液，將提取液按說明書標(biāo)準(zhǔn)操作的體積等比例調(diào)整即可。...

外泌體提取試劑盒(乳汁/唾液)

 

產(chǎn)品編號：HR8208

試劑盒組成：

儲存條件：

2-8℃保存，有效期1年。

產(chǎn)品簡介：

總外泌體提取試劑盒（乳汁/唾液用）適用于從各種乳汁/唾液樣品中提取總外泌體。不需要超速離心，僅需通過簡單的常規(guī)離心即可從樣本中獲取大量結(jié)構(gòu)完整的外泌體，具有快速簡單，提取效率高的特點(diǎn)，可節(jié)省更多的實(shí)驗(yàn)時間和樣本。提取的外泌體可根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠糜诤罄m(xù)的多種實(shí)驗(yàn)，應(yīng)用范圍廣泛。

外泌體是活細(xì)胞分泌的來源于晚期核內(nèi)體(也稱為多囊泡體)的膜性小囊泡，直徑約為30-150nm，天然存在于血液、唾液、尿液和母乳等各種體液中，研究發(fā)現(xiàn)，Exosome內(nèi)含有與細(xì)胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)、mRNA 和microRNA，并且exosome能夠通過生物屏障，在細(xì)胞間傳遞功能性核酸分子，從而發(fā)揮各種生物學(xué)功能。

外泌體囊泡已經(jīng)成為細(xì)胞間通訊的重要介質(zhì)，參與原核生物和高等真核生物細(xì)胞之間的生物信號傳遞，以調(diào)節(jié)不同范圍的生物過程。外泌體囊泡的病理生理作用開始在包括癌癥、感染性疾病和神經(jīng)變性疾病在內(nèi)的疾病中得到充分認(rèn)識，顯現(xiàn)了外泌體作為疾病的早期診斷、治療干預(yù)的潛在新靶點(diǎn)的巨大應(yīng)用前景。此外，未修飾和工程化的外泌體囊泡可能在大分子藥物遞送中具有應(yīng)用價(jià)值。

傳統(tǒng)的乳汁/唾液中分離和提取exosome 的主要方法是超速離心法，這種方法缺點(diǎn)是耗時耗力，往往需要30-70個小時，每次最多只能處理6個樣品，需要大量的起始材料，而且產(chǎn)量不高。

我公司的外泌體快速提取試劑盒產(chǎn)品，可以通過簡單離心快速高效獲得高純度外泌體顆粒。本試劑盒提取的外泌體完好無缺，能用于各種功能研究、蛋白分析及RNA 分析等下游應(yīng)用實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒按每個樣本處理2mL乳汁/唾液計(jì)，每個50T試劑盒大約可以用于提取100mL乳汁/唾液。如果需要處理大量的乳汁/唾液，將提取液按說明書標(biāo)準(zhǔn)操作的體積等比例調(diào)整即可。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

● 使用方便，無需超速離心，省時省力；

● 純度高，富集量大，應(yīng)用范圍廣；

● 獲取的Exosome 結(jié)構(gòu)和功能完整；

● 穩(wěn)定性好，便于運(yùn)輸，便于保存。

外泌體提取試劑盒(乳汁/唾液)試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 離心機(jī) ● 移液器

使用注意事項(xiàng)：

● 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑。

● 以下以2mL乳汁/唾液為例，實(shí)際操作時按乳汁/唾液樣本和提取液用量體積比等比例調(diào)整使用即可。

● 不同乳汁/唾液樣本外泌體數(shù)量差異極大，請根據(jù)實(shí)際情況選擇乳汁/唾液樣本的量，根據(jù)下游應(yīng)用和參考文獻(xiàn)確定。條件允許的情況下采用盡可能多的乳汁/唾液樣本。

● 常規(guī)的乳汁/唾液樣本最佳上樣量為5-10mL及以上，條件允許的情況下采用盡可能多的乳汁/唾液樣本。

● 已經(jīng)分離好的外泌體樣本如果需要進(jìn)行電鏡觀察，只能冰上或4℃保存，存放時間不超過兩天，注意不可冷凍保存，否則可能會影響電鏡觀察效果。

使用方法：

1、收集2mL待提取的乳汁/唾液樣品，置2-8℃保存。

【注】：

● 凍存樣品解凍后置2-8℃保存。

2、將樣品在4℃條件下，3000×g離心15分鐘。棄沉淀，收集上清。

3、小心將上清移入另一干凈離心管中。

4、將樣品在4℃條件下，10000×g離心20分鐘。棄沉淀，收集上清。

5、小心將上清移入另一干凈離心管中。

6、在2mL乳汁/唾液樣品中加入2mL提取液A，蓋緊離心管蓋，上下顛倒混勻1分鐘左右，使液體充分混勻。

7、在4mL液體樣品中加入1mL提取液B，蓋緊離心管蓋，上下顛倒混勻1分鐘左右，使液體充分混勻。

【注】：

● 試劑B使用前請充分混勻。

8、置2-8℃冰箱靜置過夜。

【注】：

● 靜置保存時間不少于10小時。

9、在4℃條件下，10000×g離心60分鐘。

10、小心移除上清，收集沉淀。

【注】：

● 盡可能吸干上清。

● 吸取時小心，防止吸掉沉淀。

11、取50-100μL外泌體保存液將沉淀重懸，即得到外泌體樣品。

【注】：

● 可以不用試劑盒中的外泌體保存液試劑C，根據(jù)下游實(shí)驗(yàn)需要用自己的其它緩沖液重懸保存外泌體。

● 也可直接用于蛋白提取。

12、將外泌體樣本-80℃保存或直接用于下游應(yīng)用。

【注】：

● 外泌體短期保存置于2-8℃保存即可，一周以上長期不用時置-80℃保存。

● 保存前可以用0.22μm過濾除菌。

外泌體提取試劑盒(乳汁/唾液)常見問題分析：

● 如何鑒定提取的外泌體？

通常使用透射電鏡檢測（形態(tài)）、粒徑檢測（大?。?、外泌體標(biāo)志蛋白Western blot檢測等方法鑒定提取的外泌體。

● 外泌體WB標(biāo)志蛋白用什么？

在進(jìn)行WB檢測時，通常檢測外泌體標(biāo)志蛋白為CD63、CD9、CD81、TSG101、ALIX、HSP70 等。

● 進(jìn)行外泌體WB鑒定時有什么內(nèi)參蛋白可供選擇？

沒有，該檢測屬于定性檢測。

● 蛋白濃度低？

很多細(xì)胞外泌體量不夠下游應(yīng)用，在條件允許的情況請盡可能加大培養(yǎng)上清的上樣量。

處理部分樣本時可能沒有裂解完全，導(dǎo)致蛋白濃度低。請選擇高質(zhì)量的蛋白裂解液或蛋白提取試劑盒。

● 抽提得到的RNA 濃度低？

很多細(xì)胞外泌體量不夠下游應(yīng)用，在條件允許的情況請盡可能加大培養(yǎng)上清的上樣量。

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