全血總蛋白提取試劑盒適用于從各種抗凝或非抗凝全血樣本中提取總蛋白。本試劑盒含有的獨(dú)特配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份，包括細(xì)胞質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。...

全血總蛋白提取試劑盒

 

產(chǎn)品編號：HR0089

產(chǎn)品組成：

儲存條件：

蛋白酶抑制劑-20℃保存；蛋白提取液2-8℃保存。有效期1年。

【注】：

● 蛋白酶抑制劑未開蓋前也可以2-8℃保存，開蓋使用后-20℃保存。

● 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

全血總蛋白提取試劑盒產(chǎn)品簡介：

全血總蛋白提取試劑盒適用于從各種抗凝或非抗凝全血樣本中提取總蛋白。本試劑盒含有的獨(dú)特配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份，包括細(xì)胞質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測定等下游蛋白研究。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳。如下游實(shí)驗(yàn)需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請使用我公司其他貨號的試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于2D電泳，用脫鹽柱脫鹽處理。需要提取血清、血漿、血細(xì)胞蛋白，可以聯(lián)系我們的客服選擇其他貨號的產(chǎn)品。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、使用方便，將蛋白提取的時間縮短至30分鐘。

2、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

3、紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

4、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 離心機(jī) ● 振蕩器 ● 渦旋混勻器 ● PBS ● 蛋白定量試劑盒

使用注意事項：

● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

● 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

● 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

● 蛋白酶抑制劑混合物避免反復(fù)凍融。

● 如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

● 本試劑盒提取的是全血總蛋白，含所有高豐度的白蛋白等。電泳前可以蛋白稀釋液稀釋至約5μg/μL。

● 電泳加Loading Buffer后水煮時，蛋白液有時會變得非常粘稠，可以用65℃保溫10分鐘代替沸水煮。

● 對于某些目的蛋白在血清中含量很低的情況，或者目的蛋白與白蛋白分子量相近的情況，可能需要先去除白蛋白，需要根據(jù)情況選擇。白蛋白等去除試劑盒需要自備。

全血總蛋白提取試劑盒使用方法：

1、提取液制備：

每500μL蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】：

● 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

● 蛋白樣品用于測定某些細(xì)胞內(nèi)蛋白酶、磷酸酶活性等下游實(shí)驗(yàn)時，注意根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整抑制劑混合物是否加入。

● 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2、取300μL全血樣品，加入300μL蛋白提取液，充分混勻后，在4℃條件下振蕩20-40分鐘。

【注】：

● 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動即可。

● 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

3、在4℃，14000×g條件下離心10分鐘。

4、將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到全血總蛋白。

【注】：

● 一般沉淀只是離心管底部薄薄一層，沒有明顯團(tuán)塊。

● 整個紅色液體即是全血蛋白上清液。

5、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

● 建議用BCA法進(jìn)行蛋白定量。

● 蛋白樣品-80℃存放一年沒問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

● 全血樣品蛋白濃度較高，需要稀釋后用于下游實(shí)驗(yàn)。一定要根據(jù)蛋白定量的情況稀釋至合適的濃度再用于電泳等下游實(shí)驗(yàn)應(yīng)用。

常見問題分析：

● 用什么方法定量蛋白？

建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

● 提取的蛋白具有活性嗎？

本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

● 電泳蛋白煮樣品后成膠狀？

全血蛋白樣品濃度極高，需要稀釋到合適的濃度再進(jìn)行下游檢測。

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