本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA,與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分,不可直接用于2D電泳,需要除鹽后再用于2D電泳。如下游實(shí)驗(yàn)需要直接用于等電聚焦、雙向電泳,請(qǐng)使用我公司其他貨號(hào)的試劑盒。...

植物總蛋白提取試劑盒

 

產(chǎn)品編號(hào)：HR0055

產(chǎn)品組成：

植物總蛋白提取試劑盒儲(chǔ)存條件：

蛋白提取液、蛋白穩(wěn)定劑2-8℃保存；蛋白酶抑制劑-20℃保存。有效期1年。

【注】：

● 蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

● 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本試劑盒提供全套試劑,適用于從各種植物細(xì)胞、組織樣本中提取總蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便。

本試劑盒含有的獨(dú)特配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份,包括細(xì)胞質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物,阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解,為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有EDTA,與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分,不可直接用于2D電泳,需要除鹽后再用于2D電泳。如下游實(shí)驗(yàn)需要直接用于等電聚焦、雙向電泳,請(qǐng)使用我公司其他貨號(hào)的試劑盒。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

● 使用方便,從細(xì)胞,組織中提取蛋白不需經(jīng)過(guò)研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。

● 提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便,將蛋白提取的時(shí)間縮短至1小時(shí)。

● 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。

● 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí),背景干擾低。

● 總蛋白提取液含多種有效成分,可充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白,又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。

● 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64,每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 離心機(jī) ● 振蕩器 ● 勻漿機(jī)/勻漿器 ● 渦旋混勻器 ● PBS緩沖液 ● 蛋白定量試劑盒

使用注意事項(xiàng)：

● 旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

● 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

● 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀,不影響使用,溶解后正常使用。

使用方法：

1、提取液準(zhǔn)備：

每500μL冷的提取液A 中加入4μL蛋白穩(wěn)定劑和2μL蛋白酶抑制劑,混勻后置冰上備用。

【注】：

● 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液,蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加過(guò)蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完,再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

● 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2、取洗凈擦干后并去除葉梗和粗脈的100-200mg鮮嫩植物組織樣本用手術(shù)剪刀盡可能剪碎,加入500μL提取液A后用勻漿機(jī)/勻漿器充分勻漿。

【注】：

● 也可置于研缽中用液氮研磨,研磨后加入500μL冷的提取液 A。

● 沒(méi)有液氮研磨條件,也可加入500μL提取液A 直接置冰上研磨。

3、將勻漿液吸入一個(gè)預(yù)冷的干凈離心管中在4℃振蕩30分鐘-1小時(shí)。

【注】：

● 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速,提取液能輕微晃動(dòng)即可。

● 無(wú)振蕩條件也可不振蕩,靜置1h,中間每隔10min用移液器吹打混勻一次。

● 有些黏液較多的樣本可能難以吸取,可以將吸頭剪掉一點(diǎn)再吸。

4、在4℃,12000×g條件下離心10-15分鐘。

5、將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管,即可得到植物總蛋白。

6、上述蛋白提取物請(qǐng)分裝后于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

● 建議用BCA法進(jìn)行蛋白定量。

● 蛋白樣品-80℃存放一年沒(méi)問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被細(xì)菌污染。

植物總蛋白提取試劑盒常見(jiàn)問(wèn)題分析：

● 蛋白濃度低？

處理部分組織樣本時(shí)可能沒(méi)有裂解完全,導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長(zhǎng)試劑A的處理時(shí)間即可。最好在持續(xù)振蕩的條件下處理,沒(méi)有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

● 用什么方法定量蛋白？

建議用BCA 法。不適合用Bradford 法,因?yàn)樵噭〢 中含有干擾Bradford 法的組份,導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過(guò)透析處理或者用脫鹽柱改換過(guò)緩沖體系,則可以用Bradford 法定量。

● 提取時(shí)出現(xiàn)膠狀沉淀？

蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時(shí)會(huì)出現(xiàn)少量透明膠狀物,屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA 等的復(fù)合物。不檢測(cè)和基因組DNA 結(jié)合特別緊密的特定蛋白的情況下,可以直接離心取上清進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)即可；如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的核蛋白,則可以通過(guò)超聲處理,300w/10 秒間隔10 秒,超聲3 分鐘,隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

● 提取的蛋白具有活性嗎？

本試劑盒不含有離子型去垢劑組份,不破壞蛋白的結(jié)構(gòu),沒(méi)有對(duì)蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞,蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

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