O12 ROS探針在組織中活性氧存在的條件下，被氧化生成綠色熒光物質(zhì)，綠色熒光強(qiáng)度與組織內(nèi)活性氧水平成正比，檢測(cè)O12產(chǎn)物的熒光就可以知道組織內(nèi)活性氧的水平。O系列活性氧探針具有多種顏色可以選擇，可根據(jù)情況對(duì)樣品進(jìn)行多色標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。除了本試劑盒的綠色熒光探針，我公司還可以提供紅色熒光的活性氧檢測(cè)試劑盒。...

組織活性氧(ROS)檢測(cè)試劑盒(O12)

 

產(chǎn)品編號(hào)：HR8820

產(chǎn)品組成：

組織活性氧(ROS)檢測(cè)試劑盒(O12)儲(chǔ)存條件：

勻漿液2-8℃保存；探針-20℃避光保存。有效期1年。

【注】：

● 探針長期不用可以-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

● 探針為DMSO溶液，冬季氣溫較低時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態(tài)后離心至管底再開蓋。

● 可以用手捂住使其融解或37℃短時(shí)間水浴。吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否則容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。

產(chǎn)品說明：

本產(chǎn)品是一種利用新型熒光探針O12進(jìn)行組織活性氧檢測(cè)的試劑盒。本試劑盒中的O12 ROS探針為綠色熒光的活性氧探針，具有488/526nm的最大激發(fā)/發(fā)射波長。

O12 ROS探針在組織中活性氧存在的條件下，被氧化生成綠色熒光物質(zhì)，綠色熒光強(qiáng)度與組織內(nèi)活性氧水平成正比，檢測(cè)O12產(chǎn)物的熒光就可以知道組織內(nèi)活性氧的水平。

O系列活性氧探針具有多種顏色可以選擇，可根據(jù)情況對(duì)樣品進(jìn)行多色標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。除了本試劑盒的綠色熒光探針，我公司還可以提供紅色熒光的活性氧檢測(cè)試劑盒。

在激發(fā)波長488 nm，發(fā)射波長526 nm附近，使用熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀、等檢測(cè)O12產(chǎn)物熒光，從而測(cè)定組織內(nèi)活性氧水平。

本試劑盒可以用于各種動(dòng)物和植物樣本的檢測(cè)。

本試劑盒只可以用于新鮮組織樣本的活性氧檢測(cè)，不可以用于凍存的組織樣本的活性氧檢測(cè)。

以每個(gè)組織樣本50mg計(jì)，本試劑盒小包裝可以染色100個(gè)樣本。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

● 使用方便：可用熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)；

● 背景低，靈敏度高；
● 線性范圍寬，使用方便。

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 熒光光度計(jì)或熒光酶標(biāo)儀,激發(fā)波長488nm,發(fā)射波長526±10nm,或者按照FITC熒光檢測(cè)條件檢測(cè)

● 離心機(jī) ● 移液器 ● PBS 緩沖液 ● 或者HBSS（無酚紅） ● 熒光專用黑色96孔板

組織活性氧(ROS)檢測(cè)試劑盒(O12)使用注意事項(xiàng)：

● 螺旋蓋微量管裝試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。

● O12染色液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時(shí)在室溫時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。

● 使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對(duì)其進(jìn)行簡短離心使DMSO溶液集中于管底。

● 盡量縮短探針標(biāo)記后到測(cè)定所用的時(shí)間，以減少各種可能的誤差。

● 必須使用熒光檢測(cè)專用的黑色96孔板。

使用方法：

試劑準(zhǔn)備：

根據(jù)樣本數(shù)量，用純水將O12探針10倍稀釋。充分混勻，備用。

【注】：

● 不可以一次性將探針全部稀釋。

● 現(xiàn)配現(xiàn)用。

樣本處理：

1、剛?cè)〉玫男迈r組織樣本用PBS洗凈。

2、準(zhǔn)確稱取50mg貨100mg組織樣本，加入500μL-1mL勻漿緩沖液A，用玻璃勻漿器充分勻漿。

3、在1000×g，4℃離心10分鐘，棄沉淀，取上清。

樣本檢測(cè)：

1、在96孔板中加入190μL勻漿上清液、10μL O12探針，用移液器吹打，使之充分混勻。

【注】：

● 不同樣本的活性氧差異較大，需要根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果調(diào)整探針用量。一般加入2-10μL探針，染色總濃度按試劑盒探針母液的200-1000倍稀釋，200倍稀釋適合大多數(shù)樣本。

● 如果熒光強(qiáng)度太強(qiáng)，超過了檢測(cè)儀器的量程，可以減少探針用量。保證所有樣本探針用量一致即可。

● 以酶標(biāo)儀檢測(cè)為例，也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)，根據(jù)所使用儀器決定勻漿液體積和染色容器。

2、在37℃避光孵育20-30分鐘。

3、置于酶標(biāo)儀中，后于激發(fā)波長為488nm、發(fā)射波長526nm檢測(cè)熒光強(qiáng)度。

【注】：

● 或使用熒光光度計(jì)等其他熒光檢測(cè)設(shè)備。

● 必須使用熒光檢測(cè)專用的黑色96孔板。

● 如果熒光強(qiáng)度太強(qiáng)，超過了檢測(cè)儀器的量程，可以將孵育后的勻漿上清液用純水稀釋后再檢測(cè)。一般稀釋5-50倍。保證所有樣本稀釋倍數(shù)一致即可。

蛋白定量：

1、另取50μL上清勻漿液，用PBS大約稀釋20-30倍。

2、取100μL進(jìn)行蛋白定量，測(cè)定蛋白濃度（mg/ml）。

結(jié)果處理：

以熒光強(qiáng)度（RFU）/蛋白濃度（毫克蛋白）表示組織活性氧強(qiáng)度。

【注】：

● 數(shù)據(jù)與蛋白濃度的單位無關(guān)。

● 此處以蛋白濃度數(shù)據(jù)作為校正系數(shù)，對(duì)不同樣品進(jìn)行均一化。

● 熒光強(qiáng)度強(qiáng)則活性氧含量高。

● 可以用實(shí)驗(yàn)中對(duì)照樣本的熒光強(qiáng)度值為基準(zhǔn)，待測(cè)組樣本的熒光強(qiáng)度值占對(duì)照樣本的百分比來比較活性氧程度差異。

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