傳統的DPH探針可以進入細胞內，我司試劑盒膜示蹤熒光探針TMA-DPH 不能進入細胞內，因此TMA-DPH 探針較DPH 探針能更準確的反應膜脂流動性，本探針的最大激發(fā)波長為355nm，最大發(fā)射波長為430nm。...

細胞膜流動性(fluidity)TMA-DPH熒光檢測試劑盒

 

產品編號：HR0954

產品組成：

保存條件：

2-8℃避光。長期-20℃避光保存。染色液避免反復凍融，需要長期保存可以分裝后-20℃保存。有效期1年。

產品簡介：

膜的流動性是生物膜結構的基本特征之一，主要指膜脂肪酸鏈部分及膜蛋白的運動狀態(tài)。膜脂類分子在相變溫度以上條件下主要有側向擴散、旋轉、左右搖擺、伸縮振蕩、翻轉及異化運動等方式。膜蛋白的運動方式大體分為側向及旋轉運動，主要受脂質雙分子層的影響。脂肪酸不飽和鍵含量和鏈的長度明顯影響著膜脂流動性，不飽和鍵的存在會降低膜脂分子間排列的有序性，從而增加膜的流動性，短鏈能減低脂肪酸鏈尾部相互作用，在相變溫度下，不易于凝集，此外，脂肪酸烴鏈圍繞C- C鍵由全反式構型到歪扭(CAUCHE)的旋轉異構運動，也可使流動性加大。

生物膜適宜的流動性是體現生物膜正常功能的必要條件，在一定范圍內，膜流動性增加，有利于膜中酶分子的擴散和旋轉運動，使酶活性增加。一些載體蛋白分子的運動性也取決于膜中脂類分子的流動性。研究發(fā)現腫瘤對化療藥物產生的耐藥性主要與細胞膜P 糖蛋白過度表達谷胱甘肽及其相關酶系活性改變有關，也有許多研究表明耐藥細胞膜流動性較親代敏感細胞明顯增加。另有實驗研究發(fā)現腹水癌細胞的惡性程度隨著膜流動性的增加而增加，白血病及轉移的腫瘤細胞的膜流動性遠遠高于非轉移細胞。因此，對敏感及耐藥的腫瘤細胞膜流動性的監(jiān)測有著重要的意義。

膜流動性的測定方法主要有熒光探針標記，電子自旋共振以及差示掃描量熱法，x 線衍射，棱碰共振等。

我司TMA-DPH試劑盒是利用TMA-DPH測定膜流動性的熒光探針法，它在脂蛋白及其類似系統的單分子層動力學研究中特別有用。DPH 及其衍生物（例如TMA-DPH）都呈圓柱形，會發(fā)生基于按長分子軸線平行排列而產生發(fā)射熒光向偶極躍遷。例如，它們對由于周圍脂類相互作用而導致的再定位非常敏感。它們廣泛地被用于旋轉運動研究中的熒光偏振分析。

傳統的DPH探針可以進入細胞內，我司試劑盒膜示蹤熒光探針TMA-DPH 不能進入細胞內，因此TMA-DPH 探針較DPH 探針能更準確的反應膜脂流動性，本探針的最大激發(fā)波長為355nm，最大發(fā)射波長為430nm。

細胞膜流動性(fluidity)TMA-DPH熒光檢測試劑盒試劑盒以外自備試劑耗材和儀器：

● 含有偏振檢測裝置的設備：熒光分光光度計/酶標儀 ● 離心機 ● HBSS(無酚紅) ● PBS
使用注意事項：

● 螺旋蓋微量管裝試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。

● 染色液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時在室溫時為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預熱，否則容易再次凝固在吸頭內壁產生損耗。

● 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。

● 染色后立即進行分析。

● 標記的條件因細胞種類而異，根據不同樣本的實際染色結果做相應調整，在每次實驗前，請先確定最佳條件。

● 必須使用細胞熒光檢測專用的黑色細胞培養(yǎng)板。

● 以下步驟僅供參考。請根據實際實驗方案實際或者參考文獻實驗。

使用方法：

1、染色工作液的配制：

用稀釋液稀釋TMA-DPH 探針1000倍-10000倍，配制成TMA-DPH染色工作液。

【注】：

●也可以不用試劑盒中的稀釋液，直接用HBSS或無血清培養(yǎng)基稀釋即可。

●使用前做預實驗在推薦濃度范圍內測試選定最佳濃度。

●推薦該探針加載濃度在1000-5000倍稀釋，具體的使用濃度需根據實驗要求進行優(yōu)化。

2、用染色工作液重懸細胞，在37℃孵育15-30分鐘。

3、用pH7.4 HBSS或20mM HEPES或PBS洗滌細胞1次。

4、用pH7.4 HBSS或20mM HEPES或PBS重懸細胞。

5、用該細胞進行檢測。激發(fā)波長 355nm，發(fā)射波長430nm。

按下列公式計算熒光偏振度P：

P=（I_VV-GI_VH）/(I_VV+GI_VH)

其中校正因子G=I_HV/I_HH

細胞膜流動性(fluidity)TMA-DPH熒光檢測試劑盒式中：

I_VV:起偏和檢偏器光軸同為垂直方向時測得的熒光強度;

I_VH:起偏和檢偏器光軸分別為垂直和水平方向時測得的熒光強度。

I_HV:起偏和檢偏器光軸分別為水平和垂直方向時測得的熒光強度;

I_HH:起偏和檢偏器光軸同為水平方向時測得的熒光強度。

P值越大,流動性越??；P值越小，流動性越大。

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