細(xì)菌外膜蛋白提取試劑盒可以從各種革蘭氏陰性菌菌體中提取外膜蛋白。本試劑盒含有的獨(dú)特配方能夠有效溶解細(xì)菌外膜組份。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。...

細(xì)菌外膜蛋白提取試劑盒

 

產(chǎn)品編號(hào)：HR0095

產(chǎn)品組成：

細(xì)菌外膜蛋白提取試劑盒儲(chǔ)存條件：

蛋白提取液2-8℃保存；蛋白酶抑制劑-20℃保存。有效期1年。

【注】：

● 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

● 蛋白酶抑制劑在2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

細(xì)菌外膜蛋白提取試劑盒可以從各種革蘭氏陰性菌菌體中提取外膜蛋白。本試劑盒含有的獨(dú)特配方能夠有效溶解細(xì)菌外膜組份。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于WB、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含高濃度鹽成分，不可直接用于2D電泳，需除鹽后再用于2D電泳。如下游實(shí)驗(yàn)需直接用于等電聚焦、雙向電泳，請(qǐng)使用我司其他貨號(hào)試劑盒。也可以用脫鹽柱脫鹽處理。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、使用方便。

2、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

3、紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

4、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化組成使其可抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

5、本品不含EDTA，可以用于金屬螯合層析等下游應(yīng)用。

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 離心機(jī) ● 振蕩器 ● 渦旋混勻器 ● 移液器 ● PBS ● 蛋白定量試劑盒

注意事項(xiàng)：

● 旋帽離心管裝試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。

● 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

● 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

● 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

使用方法：

1、提取液準(zhǔn)備：

每500μL提取液A 中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，充分混勻后置冰上備用。

【注】：

● 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加過(guò)蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

● 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2、收集待提取菌體，用PBS洗菌體2次。

3、按每50-150mg濕重菌體樣本加入500μL提取液A（大約菌體和提取液體積比1:2-1:5，完全淹沒菌體即可），吹打混勻，在2-8℃振蕩30分鐘-1小時(shí)。

【注】：

● 此步驟必須在2-8℃條件下振蕩，不可室溫處理。

● 裂解液用量并不是一定的，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整。

● 細(xì)菌外膜蛋白豐度極低，需要保證足夠的菌體上樣量才能提到足夠蛋白，在條件允許的情況下，請(qǐng)盡可能加大菌體上樣量。

● 如果沒有2-8℃振蕩條件，可以在2-8℃靜置，稍微延長(zhǎng)試劑A處理時(shí)間，中間每隔10分鐘用移液器吹打混勻。

4、將提取液在2-8℃下12000×g力離心5分鐘，取上清。

5、將上清液在37℃水浴10分鐘。

6、在37℃ 500-1000×g力離心3 分鐘。

【注】：

● 此步驟必須37℃條件下離心。

● 如果離心機(jī)不可控溫，可以不離心，延長(zhǎng)上一步驟水浴時(shí)間，至溶液分層清晰即可?；蛘咴谑覝貤l件下離心，縮短離心時(shí)間至1分鐘。

7、此時(shí)液體分為2層，小心移除上層溶液，留管底部下層大約30-50μL液體。

【注】：

● 下層為粘稠狀液體。

8、用50-150μL冷的膜蛋白溶解液B溶解該溶液，即得細(xì)菌外膜蛋白樣品。

9、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

● 建議用BCA法進(jìn)行蛋白定量。相關(guān)產(chǎn)品：HR0329。

● 蛋白樣品-80℃存放一年沒問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

● 可以用溶解液C或者其他合適緩沖液如PBS調(diào)整蛋白濃度。

細(xì)菌外膜蛋白提取試劑盒常見問(wèn)題分析：

● 蛋白濃度低？

膜蛋白豐度較低，需要盡可能加大細(xì)胞上樣量。處理部分組織樣本時(shí)可能沒有裂解完全，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長(zhǎng)試劑A的處理時(shí)間即可。最好在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。也可以用蛋白濃縮柱進(jìn)行濃縮處理（相關(guān)產(chǎn)品HR0388）。

● 用什么方法定量蛋白？

建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過(guò)透析處理或者用脫鹽柱改換過(guò)緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

● 提取的蛋白具有活性嗎？

本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對(duì)蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

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