HR8260 細(xì)胞粘附檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)育、分化及代謝狀態(tài)和外界細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)反應(yīng)等均可以影響細(xì)胞粘附,細(xì)胞粘附也可能是腫瘤細(xì)胞易發(fā)生浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等現(xiàn)象的分子基礎(chǔ)。細(xì)胞粘附檢測(cè)試劑盒含全套試劑,通過(guò)活細(xì)胞染色探針W16染色粘附的活細(xì)胞數(shù)量來(lái)反應(yīng)細(xì)胞的粘附能力變化。...
細(xì)胞粘附檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品編號(hào):HR8260
產(chǎn)品組成:
組份 |
500T |
1000T |
試劑A:細(xì)胞染色液A |
5mL |
10mL |
試劑B:洗滌液B |
50mL |
100mL |
細(xì)胞粘附檢測(cè)試劑盒儲(chǔ)存條件:
2-8℃保存;染色液開(kāi)蓋后2-8℃避光保存,長(zhǎng)期不用-20℃避光保存。有效期1年。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
細(xì)胞粘附是指細(xì)胞與細(xì)胞之間及細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間的粘附,細(xì)胞粘附是細(xì)胞維持形態(tài)結(jié)構(gòu)與功能的生物現(xiàn)象,是細(xì)胞間信息交流的一種形式。而信息交流的可溶遞質(zhì)稱細(xì)胞粘附分子(cell adhesion molecule,CAM)。細(xì)胞粘附分子是參與細(xì)胞與細(xì)胞之間及細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間相互作用的分子。 是一類獨(dú)立的分子結(jié)構(gòu),是通過(guò)識(shí)別與其粘附的特異性受體而發(fā)生相互間的粘附現(xiàn)象。
細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)育、分化及代謝狀態(tài)和外界細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)反應(yīng)等均可以影響細(xì)胞粘附,細(xì)胞粘附也可能是腫瘤細(xì)胞易發(fā)生浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等現(xiàn)象的分子基礎(chǔ)。
細(xì)胞粘附檢測(cè)試劑盒含全套試劑,通過(guò)活細(xì)胞染色探針W16染色粘附的活細(xì)胞數(shù)量來(lái)反應(yīng)細(xì)胞的粘附能力變化。
本試劑盒不含有包被液。本試劑盒使用比色法進(jìn)行檢測(cè),如果需要熒光法檢測(cè)的,請(qǐng)選用我公司貨號(hào)為HR8258的試劑盒。
本試劑盒適合進(jìn)行常規(guī)的總體粘附性能的檢測(cè)。不含有包被劑,如果需要含包被劑的,可以選用我公司貨號(hào)為HR0957的試劑盒。
產(chǎn)品特點(diǎn):
● 方便:可用酶標(biāo)儀檢測(cè);
● 快速:最快1小時(shí)內(nèi)即可完成實(shí)驗(yàn);
● 靈敏:數(shù)據(jù)可靠,重現(xiàn)性好,線性范圍更寬;
● 準(zhǔn)確:試劑本身穩(wěn)定性高,實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定可靠。
試劑盒以外自備儀器和試劑耗材:
● 酶標(biāo)儀 ● 離心機(jī) ● 移液器 ● Matrigel/Fibronectin,Fn ● PBS或者HBSS
使用注意事項(xiàng):
● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)液體損失導(dǎo)致試劑量不夠用。
● 細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。離心力在不損失細(xì)胞的前提下盡可能小,重懸細(xì)胞是動(dòng)作要輕柔,避免多次反復(fù)的激烈吹打。不用渦旋振蕩器。
● 染色培養(yǎng)時(shí)間根據(jù)細(xì)胞種類的不同和每孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量的多少而異。一般情況下,白細(xì)胞較難染色,因此需要較長(zhǎng)的培養(yǎng)時(shí)間。培養(yǎng)時(shí)間一般為1-4小時(shí),但在培養(yǎng)30分鐘左右即可取出肉眼觀察染色程度 (根據(jù)細(xì)胞種類而定,需要摸索一下條件)。當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí),貼壁細(xì)胞的最小接種量至少為1000個(gè)/孔(100μL培養(yǎng)基)。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低,因此推薦接種量不低于2500個(gè)/孔(100μL培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實(shí)驗(yàn),請(qǐng)先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量,并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入染色液B。
● 有條件的情況下建議采用多通道移液器,可以減少平行孔間的差異。加染色液B試劑時(shí),建議斜貼著培養(yǎng)板壁加,不要插到培養(yǎng)基液面下加,容易產(chǎn)生氣泡,會(huì)干擾O.D值讀數(shù)。
● OD值在0.4-2.0之間均可,最大值控制在1.0左右為宜,小于0.4或大于2.0請(qǐng)調(diào)整接種量和培養(yǎng)時(shí)間。
細(xì)胞粘附檢測(cè)試劑盒使用方法:
包被:
1、根據(jù)細(xì)胞類型,96孔板每孔加入100μL Matrigel或Fibronectin包被液。
2、將培養(yǎng)板置2-8℃過(guò)夜。
3、移除包被液。
4、用洗滌液洗滌1-3次。
細(xì)胞接種:
1、待測(cè)定細(xì)胞處理好后,用胰酶消化,PBS洗滌,然后用相應(yīng)培養(yǎng)基重懸,制成細(xì)胞懸液。
2、按5×104細(xì)胞/孔接種96孔板,建議設(shè)3-5個(gè)復(fù)孔。同時(shí)設(shè)立對(duì)照組,即孵育后不棄上清組。
3、放37℃培養(yǎng)箱孵育30分鐘-1小時(shí)。
4、取出培養(yǎng)板,吸棄培養(yǎng)基。
【注】:
● 對(duì)照孔培養(yǎng)基不要吸除。
5、然后用相應(yīng)的培養(yǎng)基洗滌2-3次。
6、每孔加入100μL新鮮培養(yǎng)基。
粘附率檢測(cè):
1、96孔板每孔加入10μL細(xì)胞染色液B。
2、37℃孵育30分鐘-4小時(shí)。
【注】:
● 不同細(xì)胞需要孵育的時(shí)間差異較大,需要摸索最佳孵育時(shí)間,一般孵育30分鐘后拿出培養(yǎng)板檢測(cè)對(duì)照細(xì)胞孔的450nm 的OD值,達(dá)到0.8-1.0即可。
3、測(cè)定樣品孔OD值。測(cè)定450 nm 各孔的吸光值,如無(wú)450nm濾光片,可以使用450-490nm的濾光片。
4、細(xì)胞粘附率計(jì)算。
將各測(cè)試孔的OD值減去空白孔(未加細(xì)胞孔)OD值。各重復(fù)孔的OD值取平均數(shù)。
細(xì)胞粘附率% =((待測(cè)細(xì)胞OD-空白OD)/(對(duì)照細(xì)胞OD-空白OD))×100
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