SuperSYBR Mixtur是高品質(zhì)的核酸擴(kuò)增(PCR)產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于生化實(shí)驗(yàn)研究等領(lǐng)域，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價(jià)位合理，需要SuperSYBR Mixtur等核酸擴(kuò)增(PCR)產(chǎn)品的客戶，請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括SuperSYBR Mixture(高含量ROX校正染料)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：SuperSYBR Mixture(高含量ROX校正染料)
英文名稱：SuperSYBR Mixture(High ROX)
產(chǎn)品貨號：WE0135
產(chǎn)品規(guī)格：5ml

  本品是專用于染料法(SYBR Green I)實(shí)時(shí)熒光定量PCR的預(yù)混體系，濃度為2×，包含BaldStar Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I熒光染料、Mg2+和ROX II校正染料，操作簡單方便。主要用于基因組DNA靶序列和RNA反轉(zhuǎn)錄后cDNA靶序列的檢測。
  本品所含的熒光染料SYBR Green I可以與所有的雙鏈DNA結(jié)合，使該產(chǎn)品可用于不同靶序列的檢測而不需合成特異性標(biāo)記探針。本品含有的BaldStar Taq DNA Polymerase是一種經(jīng)化學(xué)修飾的、全新熱啟動(dòng)酶，在常溫下沒有聚合酶活性，有效避免在常溫條件下由引物和模板非特異性結(jié)合或引物二聚體而產(chǎn)生的非特異性擴(kuò)增，酶的激活須在95℃下孵育10分鐘。獨(dú)特的PCR緩沖體系與熱啟動(dòng)酶的組合，有效抑制了非特異性的PCR擴(kuò)增，顯著提高了PCR的擴(kuò)增效率。
  所含的ROX染料可校正定量PCR儀孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號誤差，本試劑盒中ROX校正染料含量較高，適用于ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等需要較高ROX信號進(jìn)行校正的熒光定量PCR儀 。

試劑盒組成：

組份	1ml	5ml
2×SuperSYBR Mixture(High ROX)	1ml	5×1ml
ddH2O	1ml	5×1ml

產(chǎn)品特點(diǎn)
1、本產(chǎn)品中使用了全新熱啟動(dòng)酶BaldStar Taq DNA Polymerase與獨(dú)特的PCR緩沖體系，顯著提高PCR的擴(kuò)增效率，具有高靈敏度和特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。
2、適用于熒光定量PCR檢測，能夠準(zhǔn)確地對目的基因進(jìn)行定量和檢測。

注意事項(xiàng)：
1、使用前請上下顛倒輕輕混勻，盡量避免起泡，并經(jīng)短暫離心后使用。
2、本產(chǎn)品中含有SYBR Green I熒光染料和ROX染料，保存本產(chǎn)品或配制PCR反應(yīng)液時(shí)應(yīng)避免強(qiáng)光照射。
3、避免反復(fù)凍融本品，反復(fù)凍融可能使產(chǎn)品性能下降。
4、本品不能用于探針法熒光定量PCR。
5、配制反應(yīng)液時(shí)，請使用新的或者無污染的槍頭和離心管，盡量防止污染。

操作步驟：
以下舉例為常規(guī)PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件，實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的改進(jìn)和優(yōu)化。

1、PCR反應(yīng)體系

試劑	50μl反應(yīng)體系	終濃度
2×SuperSYBR Mixture(High ROX)	2 5μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物濃度以0.2μM可得到較好結(jié)果，可以終濃度0.1-1.0μM作為設(shè)定范圍的參考。
2)通常DNA模板的量以10-100ng基因組DNA或1-10ng cDNA為參照，因不同物種的模板中含有的目的基因拷貝數(shù)不同，可對模板進(jìn)行梯度稀釋，以確定zuì佳的模板使用量。
3)推薦反應(yīng)體系為50μl，也可以根據(jù)實(shí)際實(shí)驗(yàn)需求按比例擴(kuò)大或者縮小反應(yīng)體系。

2、PCR反應(yīng)程序：
注意！本產(chǎn)品預(yù)變性反應(yīng)必須在95℃ 10分鐘下完成！

建議采用下表顯示的兩步法PCR進(jìn)行程序設(shè)定，本程序是以ABI7500熒光定量PCR儀為例。若因Tm值較低的引物等原因，得不到良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，可嘗試進(jìn)行三步法PCR 擴(kuò)增，三步法操作步驟詳見《反應(yīng)條件的優(yōu)化》。

步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	95℃	10 min
變性	95℃	15 s	35-40 個(gè)循環(huán)
退火/延伸	60℃	1 min
融解曲線分析	95℃	15 s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)本產(chǎn)品所采用的熱啟動(dòng)酶須在預(yù)變性95℃、10 min條件下實(shí)現(xiàn)酶的活化。
2)退火溫度請以60-64℃作為設(shè)定范圍的參考，發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，可提高退火溫度。
3)本程序是以ABI 7900熒光定量PCR儀為參照設(shè)定，融解曲線分析請以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進(jìn)行設(shè)定。

反應(yīng)條件的優(yōu)化：
在熒光定量反應(yīng)條件優(yōu)化時(shí)，應(yīng)從引物濃度、退火溫度、延伸時(shí)間等方面進(jìn)行考慮，以提高反應(yīng)特異性和擴(kuò)增效率。
1、反應(yīng)特異性和擴(kuò)增效率高的實(shí)驗(yàn)體系應(yīng)具備以下條件：
1)反應(yīng)特異性高：陰性對照無引物二聚體等非特異性擴(kuò)增；不產(chǎn)生目的片段以外擴(kuò)增。
2)擴(kuò)增效率高：Ct值低；PCR擴(kuò)增效率高，接近理論值。
2、反應(yīng)條件優(yōu)化方法：
1)引物濃度：通常引物濃度以0.2μM可得到較好結(jié)果，可以終濃度0.1-1.0μM作為設(shè)定范圍的參考。若提高反應(yīng)特異性，可降低引物濃度；若提高擴(kuò)增效率，可增加引物的濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系。
2)退火溫度：建議采用兩步法PCR，退火溫度60℃進(jìn)行反應(yīng)。若提高反應(yīng)特異性，可提高退火溫度，以60-64℃作為設(shè)定范圍的參考。若因使用Tm值較低的引物等原因，得不到良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，可嘗試進(jìn)行三步法PCR擴(kuò)增，三步法的退火溫度請以56℃-64℃的范圍作為設(shè)定參考。
3)延伸時(shí)間：建議采用兩步法PCR，延伸時(shí)間1 min進(jìn)行反應(yīng)。若提高擴(kuò)增效率，可嘗試將延伸時(shí)間增加，或嘗試三步法PCR。
注意！本產(chǎn)品預(yù)變性反應(yīng)必須在95℃ 10分鐘下完成！

三步法熒光定量PCR(本程序是以ABI7900熒光定量PCR儀為例)：

步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	95℃	10 min
變性	95℃	10 s	35-40個(gè)循環(huán)
退火	56-64℃	30s
延伸	72℃	32s
融解曲線分析	95℃	15s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)本產(chǎn)品所采用的熱啟動(dòng)酶須在預(yù)變性95℃、10 min條件下實(shí)現(xiàn)酶的活化。
2)無法得到理想的擴(kuò)增效率時(shí)，適當(dāng)降低退火溫度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，提高退火溫度。
3)若需提高反應(yīng)擴(kuò)增效率，可適當(dāng)增加延伸時(shí)間。
4)本程序是以ABI 7900熒光定量PCR儀為參照設(shè)定，融解曲線分析請以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進(jìn)行設(shè)定。

儲存條件：-20℃，避免反復(fù)凍融

根據(jù)您的關(guān)注的SuperSYBR Mixture(高含量ROX校正染料)，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：



名稱：免DNA提取PCR試劑盒(細(xì)胞組織裂解物直接PCR試劑盒)
貨號：BTN130985
規(guī)格：100次
本產(chǎn)品是可以直接用新鮮的動(dòng)物、植物、細(xì)菌樣品的裂解液進(jìn)行PCR擴(kuò)增的試劑盒。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 操作簡單，免去DNA提取、蛋白去除、RNA去除等步驟，5分鐘即得用于PCR的模板。
2. 兼容性廣，可以用于幾乎所有的分子生物學(xué)樣品，包括細(xì)菌、昆蟲、真菌、各種植物、各種動(dòng)物、法醫(yī)樣品(包括全血液、血痕、精斑、唾液、毛發(fā)、組織樣品、口腔細(xì)胞和FTA卡)、石蠟組織切片等。
3. 提供離心管專用研磨杵，便于處理棘手樣品。
4. 環(huán)保健康，不使用任何有毒有害的試劑。
5. 尤其適用于大規(guī)模育種篩選和臨床篩選。
6. 本試劑盒可以處理100份不同的樣品，足夠100次PCR實(shí)驗(yàn)。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	12ml
溶液B	12ml
PCR MagicMix 3.0	1ml
研磨杵	100只
說明書	1份

儲存條件：溶液A、溶液B和離心管專用研磨杵可以常溫和放置，PCR MagicMix 3.0需要低溫運(yùn)輸、-20℃保存。有效期一年。

使用方法：
1. 次使用本產(chǎn)品時(shí)需要詳細(xì)檢查溶液A和溶液B是否有結(jié)晶析出。如果有需要37℃溶解后搖晃均勻待用。未用完部分可以放常溫保存。
2. 根據(jù)材料不同參考下表取少量樣品到1.5mL塑料離心管中。

樣品種類	取樣量
動(dòng)物組織	1-5mg
鼠尾	2mm長
血液樣品	不超過20μl
植物葉片	1-5mg
植物種子(去皮)	1-5mg
酵母培養(yǎng)物	0.2-0.5mL培養(yǎng)物沉淀
細(xì)菌培養(yǎng)物	0.2-0.5mL培養(yǎng)物沉淀

注意：未列出樣品，用戶需要自己摸索zuì佳用量。對富含多醌多酚的植物材料(如棉花)，組織使用量zuì好不要超過0.5mg。
3. 加入100μl溶液，確保溶液A完全將樣品淹埋。
4. 用研磨杵小心將樣品在離心管內(nèi)搗碎。血液一般情況搗碎30秒即可；實(shí)體組織需要搗碎到溶液的顏色變渾濁(植物葉片的話，溶液的顏色將變成綠色)。如需更多研磨杵，可從我司另購。對棘手的樣品，還可以增加95℃保溫10-60分鐘一步，待溫度冷卻到室溫后再進(jìn)入下一步。殘留的實(shí)體組織碎片不會(huì)影響后續(xù)試驗(yàn)。
5. 加入100μL溶液B，震蕩10秒混勻。
6. 常溫12000rpm離心2分鐘。
7. 將上清液轉(zhuǎn)移到一個(gè)干凈的1.5mL離心管中。如果不用，可以放-80℃長期保存。如果用于后續(xù)PCR，請直接進(jìn)入下步。
8. 直接用裂解液作為模板設(shè)置30μl體系的PCR反應(yīng)體系如下：

成分	用量
PCR MagicMix 3.0	15μl
細(xì)胞裂解液(來于上步)	1-5μl
自備PCR引物1(10uM)	1μl
自備PCR引物2(10uM)	1μl
補(bǔ)水到	30μl

注意：裂解液體積zuì好不要超過PCR體積的1/10。如果需要增加模板的加入量，則PCR體系應(yīng)該相應(yīng)的增加。如果加入5μL裂解液，則可以使用50μL的PCR體系。
9. 放入PCR儀中進(jìn)行PCR,PCR參數(shù)需要根據(jù)引物Tm值和靶分子長度等參數(shù)設(shè)置。一般不低于35次循環(huán)。
10. PCR結(jié)束后取5-10μL直接上樣電泳(本產(chǎn)品不需要上樣液)，紅色染料電泳速度相當(dāng)于50bp DNA片段。

注意事項(xiàng)：
1．如果反應(yīng)體系不是30μl，各成分需要等按比例增加或減少。
2．如果細(xì)胞裂解液中有不明PCR抑制物(植物、土壤和血液等DNA樣品常含此類抑制物)，可以在PCR體系中加入1/10的PCR抑制物清除劑(BTN60804，30μL體系中加3μL)，可能會(huì)對PCR有幫助。

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