人miRNA上游引物是高品質(zhì)的核酸擴(kuò)增(PCR)產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于科研目的，我公司的人miRNA上游引物品質(zhì)上佳，經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括人miRNA上游引物在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：人miRNA上游引物
英文名稱：Human miRNA Forward Primer
產(chǎn)品貨號(hào)：WH0133
產(chǎn)品規(guī)格：50μl體系×300次

microRNAs（miRNAs)是一類由18～25核苷酸組成的非編碼單鏈小分子RNA，具有表達(dá)的時(shí)序性、序列嚴(yán)格的保守性、組織器官表達(dá)量的相對(duì)特異性等特點(diǎn)，在細(xì)胞分化，生物發(fā)育及疾病發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮巨大作用。

隨著miRNA相關(guān)研究在迅速增加，為了方便客戶，我們推出了miRNA引物系列產(chǎn)品。該引物數(shù)據(jù)庫中為miRNA熒光定量檢測的上游引物；所有引物庫中的引物已經(jīng)過驗(yàn)證。驗(yàn)證樣本miRNA mimics，經(jīng)過我司miRNA cDNA鏈合成試劑盒（WH0131）合成cDNA后，配合我司miRNA熒光定量檢測試劑盒（WH0132）及試劑盒中的下游引物進(jìn)行熒光定量驗(yàn)證。

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使用方法：
本品為粉末狀引物干粉，請(qǐng)根據(jù)說明書中標(biāo)注的分子量使用RNA-free ddH2O進(jìn)行溶解，配置成100μM的儲(chǔ)存液，工作液濃度為10 μM。
建議開蓋前先短暫離心，輕啟管蓋，以免粉末損失。
溶解后的引物建議分裝后保存，以免在操作中出現(xiàn)污染和反復(fù)凍融造成的不利影響。
溶解后的引物請(qǐng)?jiān)?20度冰箱中保存。

根據(jù)您的關(guān)注的人miRNA上游引物，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：


BTN91202 雙酶一管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq) 50次
BTN130609 一步式RT-PCR Mix 1mL
BTN100203 通用型LAMP試劑盒 50次
BTN131083 Ribo-SPIA cDNA擴(kuò)增試劑盒 20次
WE0116 2×富含GC PCR MasterMix 1ml
WE0123 熱啟動(dòng)DNA聚合酶 500U|2500U
WE0144 實(shí)時(shí)熒光定量PCR的預(yù)混體系(探針法) 1ml|5ml
WE0153 快速實(shí)時(shí)熒光定量PCR的預(yù)混體系(熒光探針)(高含量ROX校正染料) 5ml

關(guān)注人miRNA上游引物，的同時(shí)，為您推薦更多您可能感興趣的產(chǎn)品：



名稱：25mM氯化錳溶液(PCR級(jí)MnCl2溶液)
貨號(hào)：BTN130307
規(guī)格：5mL
本產(chǎn)品為專門用于易錯(cuò)PCR的MnCl2水溶液，濃度為25mM，可用于調(diào)節(jié)MnCl2的zuì佳濃度。由于Mg2+在PCR過程中可以穩(wěn)定非互補(bǔ)的堿基對(duì)，Mn2+能夠降低聚合酶對(duì)模板的特異性，因而調(diào)整兩種離子的濃度，可獲得不同突變頻率的多樣性文庫。

氯化錳分子量為125.8，CAS號(hào)為7773-01-5，水合氯化錳外觀為玫瑰色單斜晶體；無水氯化錳外觀為桃紅色結(jié)晶。密度為2.977g/cm3。熔點(diǎn)是650℃。在高于熔點(diǎn)溫度下升華。沸點(diǎn)1190℃。易溶于水，溶于醇，不溶于醚。

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸、-20℃保存，有效期一年。

名稱：即用型易錯(cuò)PCR試劑盒
貨號(hào)：BTN101005
規(guī)格：100次
本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò)PCR而開發(fā)。易錯(cuò)PCR是利用Taq DNA多聚酶不具有3′→5′校對(duì)功能的特性，在一定條件下(如不同的dNTP濃度、Mg濃度和MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法，則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 即開即用，十分簡單方便，尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的優(yōu)越性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化，突變率穩(wěn)定，突變沒有趨向性。易錯(cuò)PCR的突變率為0.66%(±0.13%)，詳見使用手冊(cè)疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單，但如果在PCR引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn)，則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體，也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4.可用于連續(xù)易錯(cuò)PCR，只需把上一次易錯(cuò)PCR的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò)PCR的模板即可，使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增1kb以下的產(chǎn)物，對(duì)于1kb以上的產(chǎn)物，建議分段擴(kuò)增。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	100μl
易錯(cuò)PCR Mix，10×	300μl
易錯(cuò)PCR專用dNTP，10×	300μl
MnCl2，5mM	300μl
說明書	1份

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期為一年。

使用方法：
1.以30μL的標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng)體系為例，如果反應(yīng)體系不是30μL，各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的PCR管中，加入下列成分：

易錯(cuò)PCR Mix,10×	3μl
易錯(cuò)PCR 專用dNTP，10×	3μl
MnCl2，5mM	3μl
自備DNA模板(10ng/μL)	1μl
PCR引物(自備，10μm each)	10pmol each
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	1-5U
補(bǔ)水到	30μl

2. 按已經(jīng)優(yōu)化的PCR條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表)，然后取5μL電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的PCR條件，一般可以先嘗試下面的PCR條件：

PCR前變性	94℃ 3分鐘
易錯(cuò)PCR	94℃ 1分鐘	循環(huán)30次(見注)
	45℃ 1分鐘
	72℃ 1分鐘

注：易錯(cuò)PCR一般不需要熱啟動(dòng)，也不需要在PCR結(jié)束后做延伸處理。

循環(huán)次數(shù)與突變幾率的關(guān)系
易錯(cuò)PCR循環(huán)次數(shù)決定每個(gè)核苷酸位置的突變幾率，進(jìn)而決定每個(gè)PCR產(chǎn)物可能得突變位點(diǎn)數(shù)，所以所需循環(huán)數(shù)由客戶根據(jù)需要改動(dòng)。

PCR循環(huán)數(shù)	每個(gè)堿基突變幾率	PCR終產(chǎn)物中的突變位點(diǎn)數(shù)
		100bp	200bp	400bp	800bp	1600bp
5	0.0033	0.00	0.66	1.3	2.6	5.3
10	0.0066	0.66	1.3	2.6	5.3	11
20	0.013	1.3	2.6	5.3	11	21
30	0.020	2.0	4.0	7.9	16	32
50	0.033	3.3	6.6	13	26	53

3.電泳檢測是否得到預(yù)計(jì)長度的PCR產(chǎn)物。

疑難解答：
Q：易錯(cuò)PCR與定點(diǎn)突變PCR有什么區(qū)別？
A：定點(diǎn)突變是指通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因組，也可以是質(zhì)粒)中引入所需變化(通常是表征有利方向的變化)，包括堿基的添加、刪除、點(diǎn)突變等。它需要預(yù)先知道靶基因的序列。易錯(cuò)PCR是一種隨機(jī)突變，它不需要預(yù)先知道靶基因的序列(引物結(jié)合部分除外)，但需要后續(xù)的篩選方法篩選自己所需要的突變。
Q：易錯(cuò)PCR的錯(cuò)誤率是多少？
A：易錯(cuò)PCR的突變率為0.66%(±0.13%)，對(duì)500bp的PCR產(chǎn)物，相當(dāng)于有4%的PCR片段為野生型，12%的含一個(gè)突變，20%的含兩個(gè)突變，22%的含三個(gè)突變，18%的含四個(gè)突變，12%的含五個(gè)突變，12%的含六個(gè)或更多突變。
Q：如果需要每個(gè)核苷酸有高于0.66%的突變率，如何辦？
A：可以使用連續(xù)多次易錯(cuò)PCR來提高突變率。但zuì好先用膠純化回收PCR片段,再用于下一輪PCR。此外不能用少于千分之一的次PCR產(chǎn)物作為第二輪易錯(cuò)PCR的模板，否則多樣性將受到影響。第三輪易錯(cuò)PCRzuì好使用所有第二輪的PCR產(chǎn)物作為模板，但需要在10mL體系中完成(可以分成很多100μL體系進(jìn)行)。

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