耐熱逆轉(zhuǎn)錄酶II由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于科研目的，我公司的耐熱逆轉(zhuǎn)錄酶II品質(zhì)上佳，經(jīng)過(guò)多年的開(kāi)發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶(hù)訂購(gòu)。...

特別提示：包括耐熱逆轉(zhuǎn)錄酶II在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱(chēng)：耐熱逆轉(zhuǎn)錄酶II
英文名稱(chēng)：Reverse Transcriptase II
產(chǎn)品貨號(hào)：SY0294
產(chǎn)品規(guī)格：2000U

Reverse Transcriptase（第二代耐熱逆轉(zhuǎn)錄酶）是Reverse Transcriptase（代耐熱逆轉(zhuǎn)錄）的升級(jí)產(chǎn)品，是在M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase基礎(chǔ)上通過(guò)體外分子進(jìn)化技術(shù)獲得的全新耐熱逆轉(zhuǎn)錄酶。與上一代相比，進(jìn)一步大幅提高了熱穩(wěn)定性，50℃下半衰期超過(guò)240min，并長(zhǎng)時(shí)間耐受55℃高溫且保持穩(wěn)定，非常適合具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的RNA模板的逆轉(zhuǎn)錄。此外，增加了多個(gè)突變位點(diǎn)，進(jìn)一步增強(qiáng)了模板親和力和行進(jìn)性，大幅提升全長(zhǎng)cDNA的合成能力，可獲得長(zhǎng)達(dá)20 kb的cDNA。另外，對(duì)于常見(jiàn)的逆轉(zhuǎn)錄抑制物具有更高的耐受度，非常適合于植物組織RNA的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。

活性定義：以Poly(rA) Oligo(dT)為模板/引物，在37℃，10min內(nèi)，摻入1 nmol的dTTP為酸不性溶物質(zhì)所需要酶量定義為1個(gè)活性單位（U）。

質(zhì)量控制
核酸外切酶殘留檢測(cè)：200 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在37 oC下孵育1h，DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。
核酸內(nèi)切酶殘留檢測(cè)：200 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在37 oC下孵育1h，DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。
RNase殘留檢測(cè)：200 U本品和1 μg小鼠肝臟總RNA在37 oC下孵育1h，RNA電泳譜帶不發(fā)生變化。
功能檢測(cè)1：逆轉(zhuǎn)錄體系中加入200 U本品，以100 pg Hela cell total RNA為模板，Oligo(dT)23為引物，50 oC反應(yīng)30min。取10% cDNA產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增β-actin基因。瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，可見(jiàn)有單一的550 bp條帶。
功能檢測(cè)2：逆轉(zhuǎn)錄體系中加入200 U本品，以500 ng Hela cell total RNA為模板，Oligo(dT)23為引物，55 oC反應(yīng)45min。取10% cDNA產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增Polε基因。瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，可見(jiàn)有單一的4.8 kb (GC-rich)條帶。
功能檢測(cè)3：逆轉(zhuǎn)錄體系中加入200 U本品，以1 pg-1 μg Hela cell total RNA為模板，Oligo(dT)23VN和Random Hexamers為引物，測(cè)試qRT-PCR 性能。以6個(gè)數(shù)量級(jí)的模板量的對(duì)數(shù)值對(duì)Ct值做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，R2>0.990，斜率在-3.20到-3.60之間。

準(zhǔn)備工作
1. 防止RNase污染：請(qǐng)保持實(shí)驗(yàn)區(qū)域潔凈；操作時(shí)需穿戴干凈的手套、口罩；實(shí)驗(yàn)所用的離心管、槍頭等耗材均需保證RNase free。
2. 引物選擇：
2.1 后續(xù)實(shí)驗(yàn)為PCR
a, 如果模板為真核生物來(lái)源，一般情況下選Oligo dT18，與真核生物mRNA的3’Poly A尾配對(duì)，可獲得zuì高產(chǎn)量的全長(zhǎng)cDNA。
b, 基因特異性引物 (GSP)的特異性zuì高。但有些情況下，用于PCR反應(yīng)的GSP無(wú)法有效引導(dǎo)鏈cDNA合成。這時(shí)，可改用Oligo dT18或Random hexamers重新進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。
c, Random hexamers特異性zuì低，所有RNA，包括mRNA, rRNA, tRNA均可以作為Random hexamers的模板。當(dāng)目標(biāo)區(qū)域具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)或GC含量較高，或者模板為原核生物來(lái)源，使用Oligo dT18或基因特異性引物 (GSP)無(wú)法有效引導(dǎo)cDNA合成時(shí)，可使用Random hexamers為引物。
2.2 后續(xù)實(shí)驗(yàn)為qPCR
a, 將Oligo dT18與Random hexamers混合使用，可使mRNA的各個(gè)區(qū)域均能以相同效率引發(fā)cDNA合成，有助于提高定量結(jié)果的重復(fù)性。

根據(jù)您的關(guān)注的耐熱逆轉(zhuǎn)錄酶II，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：


YT402 核酸酶/RNA/DNA清除劑(噴霧清除劑) 250ml
WE0106 2×BAmp MasterMix(含染料) 5ml
WE0124 多重PCR Mix 1ml|5ml
WE0133 cDNA鏈合成試劑盒(去除基因組DNA) 100次
ALH264 熒光定量用鏈反轉(zhuǎn)錄預(yù)混合液 20μl×50次
RFT103 高保真DNA聚合酶 500U(100μl)|5×500U(5×100μl)
SY0025 PCR Master Mix (含染料) 1ml

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貨號(hào)	名稱(chēng)	規(guī)格
BTN131212	PCR Mix染料	10mL
BTN100839	PCR級(jí)甲酰胺	250mg
BTN90805	即用型PCR試劑盒(含染料)	1ml×10|5mL×20
BTN160903	可調(diào)式易錯(cuò)PCR試劑盒	100次
BTN130911	miRNA cDNA鏈合成試劑盒	25次
YT383	PCR Master Mix (含綠色電泳染料)	400次|2000次10000次

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