北京百奧萊博供應(yīng)的化學(xué)發(fā)光法生物素標(biāo)記核酸檢測(cè)試劑用于科研目的，我公司的化學(xué)發(fā)光法生物素標(biāo)記核酸檢測(cè)試劑品質(zhì)上佳，經(jīng)過(guò)多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購(gòu)。...

特別提示：包括化學(xué)發(fā)光法生物素標(biāo)記核酸檢測(cè)試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：化學(xué)發(fā)光法生物素標(biāo)記核酸檢測(cè)試劑盒
英文名稱：Chemiluminescent Biotin-labeled Nucleic Acid Detection Kit
產(chǎn)品貨號(hào)：YT032
產(chǎn)品規(guī)格：1000cm2

本試劑盒是一種通過(guò)Streptavidin-HRP及后續(xù)的ECL試劑來(lái)實(shí)現(xiàn)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)Biotin標(biāo)記核酸的檢測(cè)試劑盒。適用于Southern blot、Northern blot、ribonuclease protection assay (RPA)或EMSA等實(shí)驗(yàn)中，采用生物素標(biāo)記的DNA或RNA探針時(shí)的檢測(cè)。本試劑盒不適用于生物素標(biāo)記蛋白的檢測(cè)。

本試劑盒采用了高質(zhì)量的Streptavidin-HRP Conjugate，HRP和Streptavidin共價(jià)交聯(lián)的比例大于3，這樣比采用Streptavidin和Biotin-HRP conjugate兩種試劑進(jìn)行檢測(cè)要更方便，并且靈敏度更高。采用了非特異性結(jié)合比avidin更低的strepatavidin，使檢測(cè)結(jié)果背景更低靈敏度更高。

本試劑盒沒(méi)有提供生物素探針標(biāo)記相關(guān)的試劑，生物素標(biāo)記的DNA探針或EMSA探針的制備可以相應(yīng)地使用百奧萊博的生物素標(biāo)記DNA試劑盒（TdT加尾法）或EMSA探針生物素標(biāo)記試劑盒(YT189)。本試劑盒可以用于檢測(cè)至少10塊10 x 10cm有生物素標(biāo)記EMSA探針的膜，即共1000cm2。

試劑盒組份：

ECL A液	55ml
ECL B液	55ml
Streptavidin-HRP Conjugate	100μl
封閉液	380ml
洗滌液(5X)	250ml
檢測(cè)平衡液	250ml

儲(chǔ)存條件：-20℃。

使用說(shuō)明：
1. 在使用Biotin標(biāo)記探針的情況下，完成Southern、Northern雜交及后續(xù)洗滌后，或RPA的轉(zhuǎn)膜和交聯(lián)后，或EMSA的轉(zhuǎn)膜和交聯(lián)后，可以使用本試劑盒開始檢測(cè)。下面的檢測(cè)過(guò)程中溶液的用量是用于一片10x10cm膜的量。如果膜較大或較小，各溶液的用量可以按比例放大或縮小。
2. 37-50oC水浴溶解封閉液和洗滌液。
注意：封閉液和洗滌液必須完全溶解后方可使用，封閉液和洗滌液可以在室溫至50oC之間使用，但必須確保這兩種溶液中均無(wú)沉淀產(chǎn)生，在冬天需特別注意。
3. 取一合適的容器加入15ml封閉液，再放入交聯(lián)過(guò)的含有樣品的尼龍膜。在側(cè)擺搖床或水平搖床上緩慢搖動(dòng)15分鐘。
4. 取7.5μl Streptavidin-HRP Conjugate加入到15ml封閉液中(1:2000稀釋)，混勻備用。
5. 去除封閉液，加入上一步中配制的15ml含有Streptavidin-HRP Conjugate的封閉液。在側(cè)擺搖床或水平搖床上緩慢搖動(dòng)15分鐘。
6. 取25ml 洗滌液(5X)，加入100ml重蒸水或MilliQ級(jí)純水，混勻配制成125ml洗滌液。
7. 將尼龍膜轉(zhuǎn)移至另一裝有15-20ml洗滌液的容器內(nèi)，漂洗1分鐘。
8. 去除洗滌液，加入15-20ml洗滌液，在側(cè)擺搖床或水平搖床緩慢上洗滌5分鐘。
9. 重復(fù)步驟8三次(共洗滌四次)，每次洗滌時(shí)間均約為5分鐘。
10. 將尼龍膜轉(zhuǎn)移至另一裝有20-25ml檢測(cè)平衡液的容器內(nèi)，在側(cè)擺搖床或水平搖床上緩慢搖動(dòng)5分鐘。
11. 取5ml ECL A液和5ml ECL B液混勻，配制成ECL工作液。注意：ECL工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。說(shuō)明：從本步驟起操作方法和注意事項(xiàng)同Western實(shí)驗(yàn)的熒光檢測(cè)。
12. 取出尼龍膜，用吸水紙吸去過(guò)多液體。立即將膜的樣品面向上，放置到處于水平桌面上的潔凈容器內(nèi)或保鮮膜上。
13. 在尼龍膜的表面小心加上步驟11配制好的共10ml ECL工作液，使工作液完全覆蓋尼龍膜。室溫放置2-3分鐘。
14. 取出尼龍膜，用吸水紙吸去過(guò)多液體。將尼龍膜放在兩片保鮮膜或其它適當(dāng)?shù)耐腹獗∧ぶ虚g，并固定于壓片暗盒(也稱片夾)內(nèi)。
15. 用X光片壓片1-5分鐘?？梢韵葔浩?分鐘，立即顯影定影，然后根據(jù)結(jié)果再調(diào)整壓片時(shí)間；也可以直接分別壓片30秒、1、3、5分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間，然后一起顯影定影觀察結(jié)果。

根據(jù)您的關(guān)注的化學(xué)發(fā)光法生物素標(biāo)記核酸檢測(cè)試劑盒，化學(xué)發(fā)光法Biotin標(biāo)記核酸檢測(cè)試劑盒，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：



名稱：BLOTTO溶液
貨號(hào)：BTN100812
規(guī)格：250mL
BLOTTO全名是Bovine Lacto TransferTechnique Optimizer，是一種含有脫脂奶粉、磷酸鹽和抗菌劑的雜交阻斷劑，可以用于DNA雜交(Southern雜交、斑點(diǎn)雜交、菌落雜交)、Western雜交、ELISA；但不能用于RNA雜交和低拷貝的Southern雜交。也不能與含高濃度的SDS混用。

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸、-4℃保存(不能保存在-20℃)，有效期一年。

名稱：脫脂奶粉
貨號(hào)：BTN130907
規(guī)格：50g
本產(chǎn)品為分子生物學(xué)級(jí)脫脂奶粉，可廣泛用于Southern、Northern和Western印跡雜交實(shí)驗(yàn)的封閉試驗(yàn)。

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸和保存、有效期半年。

名稱：SSPE溶液，20×
貨號(hào)：BTN100809
規(guī)格：250mL
20×的SSPE含3M NaCl、0.2M NaH2PO4、0.02M Na2EDTA，pH為7.4。它是一種在核酸分子雜交中廣泛使用的溶液。其特點(diǎn)先是鹽濃度接近飽和，可以非常方便地稀釋到不同濃度，提供不同的雜交和洗滌嚴(yán)謹(jǐn)度。其次，高鹽濃度可以抑制微生物生長(zhǎng)，便于長(zhǎng)期放置。zuì后，它可以用于幾乎所有核酸雜交試驗(yàn)。由于緩沖能力比SSC強(qiáng)，更適合于需要穩(wěn)定pH的實(shí)驗(yàn)。

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸及保存、有效期兩年。

名稱：超級(jí)雜交液(不含甲酰胺)
貨號(hào)：BTN8091
規(guī)格：100mL
核酸雜交一般是指用一種標(biāo)記的核酸探針與印跡膜上的核酸進(jìn)行雜交，由此檢測(cè)印跡膜上是否存在與探針同源的核酸分子(靶分子)。核酸雜交是分子生物學(xué)的基本技術(shù)之一，應(yīng)用非常廣泛。由于核酸雜交效率受印跡膜種類、雜交溫度、探針濃度、雜交液離子強(qiáng)度、雜交液pH及雜交液粘度等因素影響，用戶自己摸索和優(yōu)化相關(guān)條件非常繁瑣，因此本公司開發(fā)了本產(chǎn)品，其操作流程如下：


產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 既可用于Southern雜交(靶分子為DNA)，也可用于和Northern雜交(靶分子為RNA)，還可以用于菌落雜交，基因芯片等雜交。
2. 既可以用于同位素探針的雜交，也可以用于非同位素探針的雜交。
3. 既可以使用DNA(包括DNA Oligo)探針，也可以使用RNA探針(包括RNA Oligo)
4.含多種能夠促進(jìn)雜交的聚合物，使雜交反應(yīng)能在6～12小時(shí)完成，而常規(guī)雜交反應(yīng)一般需要12～24小時(shí)。
5.含多種封堵劑，能阻印跡膜對(duì)探針?lè)肿拥姆翘禺愋晕?，能有效降低背景信?hào)，延長(zhǎng)曝光時(shí)間以便檢測(cè)到低拷貝的RNA(Northern)和單拷貝的基因(Southern)。
6. A型不含甲酰胺，B型含50%的甲酰胺。后者使雜交在較低溫度就可以完成，適合Tm 較高的分子雜交(如RNA-RNA和RNA-DNA雜交)。
7.跟各種常用的印跡膜兼容，包括硝酸纖維素膜和尼龍膜。

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。本產(chǎn)品屬于高鹽溶液，低溫下產(chǎn)生沉淀，必須在65℃加熱溶解并充分搖勻后才能使用。

使用方法：

一、根據(jù)探針和靶分子的不同，分別按下面不同情況計(jì)算雜交分子的Tm 值
1. 對(duì)DNA-DNA雜交，其Tm = 81.5 + 16.6×log10[Na+] + 0.41×GC%–500/L
說(shuō)明：L是探針或靶分子的長(zhǎng)度(用兩者中zuì短的一個(gè))
GC%是探針或靶分子中的GC 百分比(用兩者中zuì短的一個(gè))
Na+濃度是本產(chǎn)品中Na+的濃度，為0.75 M，16.6 ×log10[Na+]=(-2.07)
2. 對(duì)DNA-RNA雜交，其Tm 值比DNA-DNA的Tm 值要高10-15℃。
3. 對(duì)RNA-RNA雜交，其Tm 值比DNA-DNA的Tm 值要高20-25℃。
4. 對(duì)Oligo探針雜交，Tm=GC 數(shù)量×4℃+AT 數(shù)量×2℃。

二、確定zuì佳雜交溫度(預(yù)雜交溫度跟雜交溫度應(yīng)該一樣)
1. 對(duì)于大于200bp的DNA-DNA雜交，zuì佳雜交溫度一般比Tm低15-25℃，一般選擇68℃。
2. 對(duì)RNA-RNA或DNA-RNA雜交，zuì佳雜交溫度一般比Tm低15-25℃。如果這樣計(jì)算出的雜交溫度很高(如高于70℃)，則RNA容易降解，所以zuì好選用含甲酰胺的超級(jí)雜交液(B型本產(chǎn)品)，以便能在42℃完成雜交。
3. 對(duì)Oligo探針的雜交，zuì佳雜交溫度一般比Tm低5℃。由于Oligo較短，更容易受各種因素影響(如錯(cuò)配率、修飾堿基比例等)，所以zuì佳溫度需要適度摸索和優(yōu)化。

三、確定洗膜溫度
一般使用0.1×SSC做洗膜液，在此條件下的zuì佳洗膜溫度比Tm低5-12℃，一般情況下可以在55℃進(jìn)行洗膜。Oligo探針可以室溫洗膜。

四、預(yù)雜交步驟
預(yù)雜交就是用不含探針的本產(chǎn)品跟印跡膜進(jìn)行孵育，其目的是用所含的非特異性DNA分子(鮭精DNA或小牛胸腺DNA)及其它高分子化合物將印跡膜上會(huì)非特異地吸附探針?lè)肿拥奈稽c(diǎn)封閉，否則這些位點(diǎn)會(huì)吸附標(biāo)記的探針，造成高背景。
1. 將結(jié)合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的6×SSC溶液中，使其充分濕潤(rùn)。
2. 將濕潤(rùn)的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋zuì好預(yù)先封口，再剪掉一角，留一個(gè)小口)，按每平方厘米印跡膜加0.2mL超級(jí)雜交液的比例沿小口加入超級(jí)雜交液，然后用塑料封口機(jī)將口封牢。
3. 將此塑料袋浸沒(méi)入溫度設(shè)定在zuì佳雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中，保溫1-2小時(shí)，延長(zhǎng)到12-16小時(shí)亦可。注意保溫過(guò)程中塑料袋應(yīng)在不停的搖動(dòng)狀態(tài)中，使超級(jí)雜交液與印跡膜充分接觸。

五、雜交步驟
1. 如果標(biāo)記的探針是雙鏈核酸，則需經(jīng)變性處理。具體操作是將探針樣品在沸水浴中加熱5分鐘，然后迅速置冰浴中。如果是單鏈DNA或RNA探針，則不需變性，直接使用。
2. 將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預(yù)雜交的雜交袋中(先用剪刀剪一小口，加入探針后用熱封機(jī)封口)。探針的加入量視探針標(biāo)記效率而定，一般要求終濃度不能低于1-2 ng/mL。如果檢測(cè)基因組中的單拷貝基因，探針的加入量應(yīng)加大，而對(duì)于檢測(cè)克隆的基因片段，則探針的量可減少。如果是放射性探針，應(yīng)將此塑料袋套在另一塑料袋之中，以避免雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。
3.在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫，時(shí)間一般為6-12小時(shí)。

六、洗膜步驟。注意在下面的所有操作過(guò)程中，一定不要使印跡膜干燥。
此步是將與印跡膜非特異結(jié)合的探針?lè)肿酉慈ザ涣粝绿禺惤Y(jié)合的探針?lè)肿?。由于非特異性雜交的雜交分子解鏈溫度較低，熱穩(wěn)定性較差，在一定的溫度和較低的離子強(qiáng)度下，即可洗掉。
1.雜交完畢，取出塑料袋，剪去一角，倒出所有的含探針的雜交液。此含探針的雜交液可以多次使用再倒棄。
2. 剪開雜交袋，用鑷子取出印跡膜，浸沒(méi)于大量的2×SSC(含0.5%SDS)溶液中，室溫下振蕩漂洗15分鐘。
3. 重復(fù)上步操作一次。
4. 將印跡膜轉(zhuǎn)移至0.1×SSC(含0.1% SDS)溶液中，在計(jì)算好的洗膜溫度下振蕩漂洗30分鐘至1小時(shí)。
5. 重復(fù)上步操作一次。如果是同位素標(biāo)記探針，則需要重復(fù)至用蓋革計(jì)數(shù)器在無(wú)核酸區(qū)域檢測(cè)不出放射信號(hào)為止。
6. 將印跡膜轉(zhuǎn)移到濾紙上，吸去表面液體后印跡膜即可用于后續(xù)檢測(cè)。

疑難解答：
問(wèn)題一：高背景(有或沒(méi)有雜交信號(hào))
解決方案：將放射性探針的比活降低到2×10E6 cpm/mL以下；將非放射性探針的終濃度降低到30 ng/mL以下；將探針長(zhǎng)度控制在200–800 核苷酸；減少雜交時(shí)間；適當(dāng)提高雜交溫度。
問(wèn)題二：沒(méi)有雜交信號(hào)或雜交信號(hào)非常弱
解決方案：雜交過(guò)程中應(yīng)應(yīng)該連續(xù)振蕩，不應(yīng)該有氣泡，避免印跡膜變干。將放射性探針活性提高到>5×10E8 cpm/ng，提高非放射性標(biāo)記探針的終濃度；適當(dāng)降低雜交溫度。

關(guān)注化學(xué)發(fā)光法生物素標(biāo)記核酸檢測(cè)試劑盒，化學(xué)發(fā)光法Biotin標(biāo)記核酸檢測(cè)試劑盒的同時(shí)，為您推薦更多您可能感興趣的產(chǎn)品：


BTN9060 TdT加尾法DNA探針標(biāo)記試劑盒 5次
BTN100921 地gāo辛標(biāo)記dUTP溶液(Digoxin-11-dUTP) 25μL
BTN151203 生物素標(biāo)記UTP溶液(Biotin-16-UTP ) 25μL
BTN90603A 隨機(jī)引物法DNA探針標(biāo)記試劑盒 5次
BTN120653C 填入法DNA末端標(biāo)記試劑盒(地gāo辛標(biāo)記dUTP) 5次
BTN100812 BLOTTO溶液 250mL
BTN91104B Denhardt溶液(非同位素探針) 250mL
BTN130908 鯡魚精DNA溶液 1mL

如果您覺得“YT032 化學(xué)發(fā)光法生物素標(biāo)記核酸檢測(cè)試劑”描述資料不夠齊全，請(qǐng)聯(lián)系我們獲取詳細(xì)資料。(聯(lián)系時(shí)請(qǐng)告訴我從給覽網(wǎng)看到的，我們將給您最大優(yōu)惠！)
本頁(yè)鏈接：http://jssdj.com/com_bjbiolab/sell/itemid-8554587.html
已經(jīng)有952位訪客查看了本頁(yè).