北京百奧萊博供應的雙酶一管式RT-PCR試劑盒用于科學研究，我公司的雙酶一管式RT-PCR試劑盒品質(zhì)上佳，經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括雙酶一管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：雙酶一管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq)
英文名稱：Two-Enzyme One-Tube RT-PCR Kit
產(chǎn)品貨號：BTN91202
產(chǎn)品規(guī)格：50次

本產(chǎn)品是經(jīng)過精心優(yōu)化的、基于MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq DNA聚合酶的雙酶一管式RT-PCR試劑盒，它含有除模版RNA和其專一性引物以外的所有RT-PCR試劑，包括MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq DNA聚合酶、RT-PCR緩沖液等，可以在同一反應管內(nèi)完成RNA→cDNA→PCR反應(RT-PCR反應)。

產(chǎn)品特點：
1.一管式完成RT-PCR反應，避免樣品交叉污染。
2. 即開即用，用戶不需要單獨準備RT-PCR所需的各種試劑。
3. 主要成分只有兩個RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix，將加樣步驟減少到zuì低，大降低了加樣誤差，增加了可重復性。
4. 使用范圍廣，適用于從病毒RNA 到人RNA的各種RNA 模板。
5.高靈敏度，每個RT-PCR 體系zuì低可以檢測200拷貝的RNA分子，可擴增的模版RNA的zuì長達2000nt。
6. 所得RT-PCR產(chǎn)物可以直接用于AT克隆。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
雙酶一管式RT-PCR Buffer(2×)	750μl
MMLV-Taq Mix	100μl
RNase-free水	1ml
說明書	1份

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：所有離心管用前zuì好全部短暫離心幾秒使管壁上溶液沉淀到管底。下面以一個30μL 體系的RT-PCR 為例，如果體積不同，各成分用量需要適當調(diào)節(jié)。
1.在一干凈的無RNase的PCR管中，先加入下列成分：

成分	陰性對照	樣品
RNA模板(自備，分下面三種情況)	無	見下
總RNA	無	100-500ng
或poly(A)mRNA	無	10-500ng
或體外轉(zhuǎn)錄得到的專一RNA	無	0.01 pg-500ng
RNA特異性引物一(自備)	終濃度300nM	終濃度300nM
RNA特異性引物二(自備)	終濃度300nM	終濃度300nM
探針(僅對Realtime RT-PCR)	終濃度200nM	終濃度200nM
RNase-free水	補到13μL	補到13μL
雙酶一管式RT-PCR Buffer(2×)	15μl	15μl
MMLV-Taq Mix	2μl	2μl

注：通常初次使用本試劑時，可用引物濃度300nM，探針濃度200nM進行實驗，根據(jù)實驗結(jié)果具體情況，在200～800nM 范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度，在50～400nM 范圍內(nèi)調(diào)整探針濃度以達到zuì佳檢測效果。引物、探針、待檢樣品的具體加量用戶可以根據(jù)實際情況調(diào)整，同時增減DEPC 水用量，保證總反應體積不變即可。
2. 輕柔混合均勻后放入PCR 儀中進行RT-PCR。
3. 設定RT-PCR反應條件時，一般將RT的條件設定成42℃，30 鐘，后接94℃變性5分鐘，然后進入PCR循環(huán)(PCR參數(shù)將根據(jù)自備引物的Tm 值由用戶自行決定注)、zuì后72℃，5分鐘。對Realtime PCR，在復性步驟設置熒光檢測，檢測通道：FAM/HEX/VIC/ROX/CY5
4. RT-PCR結(jié)束后取5-10μL電泳檢查。

注意事項：
1. 使用已校準的移液器，選用一次性PCR反應管、離心管、tip 頭等進行樣本處理及配液等操作，所有用具應不含DNA酶和RNA酶。
2.引物、探針設計過程中應盡可能避免發(fā)夾結(jié)構(gòu)、二聚體等現(xiàn)象的發(fā)生，探針的位置盡可能靠近上游引物，PCR 目標片段zuì好小于200bp，盡可能在150bp以內(nèi)。
3. 實驗樣品盡可能新鮮，提取過程應嚴防RNA酶污染及操作不當導致的RNA 降解。
4. 使用本產(chǎn)品時建議對RT-PCR擴增條件、引物濃度和樣品用量進行調(diào)整，選擇zuì適當?shù)囊餄舛?、樣品濃度和PCR擴增條件。
5. 本產(chǎn)品使用前應在室溫充分融解，并用漩渦震蕩器充分混勻。
6. 統(tǒng)一配液后分裝以減少加樣誤差，每次實驗應設置陰性對照。
7. 禁止標記PCR反應管，避免外源性熒光信號干擾。
8. PCR反應管中不能有氣泡，否則會產(chǎn)生非特異的熒光信號。若有氣泡，可先用手指將氣泡彈破，然后再低速離心消除。
9. 實時熒光PCR 儀器連續(xù)進行實驗時，zuì好間隔一小時以上再使用。
10. 實時熒光PCR 儀需經(jīng)常校正和清潔載樣板板孔。
11. 若使用Roch LightCyclerTM熒光PCR 儀，應將毛細管放在專門套管中，以便分裝反應體系和加入待檢樣品。前述操作完畢應低速離心數(shù)秒再將毛細管垂直緩慢放入樣品架，以免折斷；若發(fā)生折斷，應小心取出，用專用小毛刷擦拭干凈后方可進行擴增。
12. 實驗室應嚴格分區(qū)，避免PCR產(chǎn)物污染。

根據(jù)您的關注的雙酶一管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq)，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：

貨號	名稱	規(guī)格
BTN91202	雙酶一管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq)	50次
BTN100203	通用型LAMP試劑盒	50次
WE0106	2×BAmp MasterMix(含染料)	5ml
WE0108	2×Pfu MasterMix(含染料)	5ml
WE0129	一步法RT-PCR試劑盒	100次
WE0145	實時熒光定量PCR的預混體系(探針法)(低含量ROX校正染料)	5ml

關注雙酶一管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq)，的同時，為您推薦更多您可能感興趣的產(chǎn)品：



名稱：DMSO，PCR級
貨號：BTN80205
規(guī)格：1.5mL
大量實驗顯示5-10%的DMSO能夠促進PCR反應，尤其是高GC模板的PCR反應，本產(chǎn)品就是專門用于PCR或RT-PCR的高純度DMSO。

儲存條件：常溫運輸及保存，有效期一年。

名稱：硫酸鎂溶液(PCR級MgSO4溶液)
貨號：BTN130840
規(guī)格：5mL
本產(chǎn)品為專門用于PCR的MgSO4溶液，濃度10mM，可以用于調(diào)節(jié)MgSO4的zuì佳濃度。MgSO4為常用的PCR增強劑之一。

儲存條件：低溫運輸、-20℃保存，有效期一年。

名稱：25mM氯化錳溶液(PCR級MnCl2溶液)
貨號：BTN130307
規(guī)格：5mL
本產(chǎn)品為專門用于易錯PCR的MnCl2水溶液，濃度為25mM，可用于調(diào)節(jié)MnCl2的zuì佳濃度。由于Mg2+在PCR過程中可以穩(wěn)定非互補的堿基對，Mn2+能夠降低聚合酶對模板的特異性，因而調(diào)整兩種離子的濃度，可獲得不同突變頻率的多樣性文庫。

氯化錳分子量為125.8，CAS號為7773-01-5，水合氯化錳外觀為玫瑰色單斜晶體；無水氯化錳外觀為桃紅色結(jié)晶。密度為2.977g/cm3。熔點是650℃。在高于熔點溫度下升華。沸點1190℃。易溶于水，溶于醇，不溶于醚。

儲存條件：低溫運輸、-20℃保存，有效期一年。

名稱：即用型高保真PCR試劑盒
貨號：BTN90708
規(guī)格：1.5mL
本產(chǎn)品是即用型的2×高保真PCR預配反應液，含有除引物、模板以外的所有PCR試劑，包括Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR 增強劑、上樣染料等，特別適合于高保真PCR反應。

產(chǎn)品特點：
1. Pfu DNA聚合酶是使用zuì廣泛的高保真酶，其保真度為普通Taq酶的10倍。
2. 使用時只需在加入模板和引物并稀釋到1倍濃度即可進行PCR反應，非常方便，簡化了PCR的準備工作。
3. PCR反應所必需試劑全集于一管之中，數(shù)分鐘即可完成反應體系配置。由于加樣過程少，有利于減少污染，降低實驗誤差。
4. 本產(chǎn)品A型含電泳染料，PCR反應液可直接上樣電泳，進一步簡化了操作。
5. 由于各成分的濃度和比例都經(jīng)過精心優(yōu)化，反應的靈敏度高，特異性強。
6.適用于基因的高保真擴增和基因定點突變等實驗，得到的PCR產(chǎn)物可用于平末端克隆。

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，保存期限為12個月。

使用方法：
將本產(chǎn)品與用戶自備的模板，引物混合液按下列推薦使用量(30μL反應體系)加入PCR 管中即可進行PCR，反應結(jié)束后直接取5-15μL電泳檢查擴增結(jié)果。如果反應體系不是30μL，各成分需要按比例增加或減少。

試劑		加入量
2×高保真PCR MagicMix		25μL
DNA模板(自備)	哺乳動物基因組DNA	0.5-1μg
	酵母基因組DNA	5-500ng
	細菌基因組DNA	0.5-50ng
	質(zhì)粒DNA	5-500ng
	PCR回收片段	1-100pg
PCR引物(自備)		10-20pmol each
補水到		30μL

參考擴增條件：

預變性	94℃	4min
PCR(30個循環(huán))	94℃	30s
	50℃	30s
	68℃	0.5kb/min
延伸	68℃	10min

注意事項：
1. 本產(chǎn)品的Pfu DNA聚合酶比Taq DNA聚合酶的延伸反應速率低，因此我們推薦的擴增延伸反應時間為每kb 需2 分種。
2. Pfu酶3′-5′外切酶活性可降解引物，所以強烈建議在冰上配置完成PCR反應液后，立即放入PCR 儀中進行擴增，擴增完畢后立即進行電泳檢測。
3. 本產(chǎn)品擴增產(chǎn)物為平末端，不可以直接進行TA 克隆，可以使用ClionB載體(BTN51104)進行克隆。如需要進行TA克隆，建議對PCR產(chǎn)物純化后，用加A 試劑盒(BTN60105)加A后再進行TA克隆。
4. 由于Pfu 無 5′到 3′外切酶的活性，所以本試劑盒不能用于實時熒光PCR。

疑難解答：
Q：為何Pfu DNA Polymerase擴增效率不如Taq DNA Polymerase？
A：一是由于Pfu DNA Polymerase 具有3′-5′的外切活性，所以在合成過程中，該酶會隨時校對新添加的核苷酸是否配對，影響了合成效率；二是它能通過3′-5′的外切活性使引物部分降解，降低引物結(jié)合模板的能力，進而影響擴增效率。三是上面提到的尿嘧叮抑制作用。
Q：使用本產(chǎn)品時還有哪些注意事項？
A：1.引物長度和濃度一般應比常規(guī)的PCR 長和高(考慮到被Pfu DNA Polymerase的3′-5′的外切活性降解的因素)；
 2.zuì好在反應前加Pfu DNA Polymerase。

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