YT413 溶菌酶(>20KU/mg)

溶菌酶(>20KU/mg)是高品質(zhì)的克隆與表達(dá)產(chǎn)品,由北京百奧萊博供應(yīng),本產(chǎn)品用于科研試驗(yàn),我公司專注于克隆與表達(dá)產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng),為您提供的溶菌酶(>20KU/mg)質(zhì)量可靠,批間差小,且價(jià)格公道,熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。...
特別提示:包括溶菌酶(>20KU/mg)在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:溶菌酶(>20KU/mg)
英文名稱:Lysozyme
產(chǎn)品貨號(hào):YT413
產(chǎn)品規(guī)格:0.5g
本品純化自蛋清,不含DNase、RNase和Protease,可以用于以質(zhì)粒抽提、蛋白純化等為目的的細(xì)菌裂解。
儲(chǔ)存條件:-20℃。
根據(jù)您的關(guān)注的溶菌酶(>20KU/mg),您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求:
名稱:B載體
貨號(hào):BTN51104
規(guī)格:2μg
本產(chǎn)品是專門用于快速克隆平末端DNA片段的專用載體,它是由Sma I酶切ClionG載體后經(jīng)過純化得到的即用型線性載體。跟ClionG載體一樣,本產(chǎn)品帶有自殺基因,Sma I位點(diǎn)位于該基因之中,只有當(dāng)外源平末端DNA 插入片段插入Sma I位點(diǎn),連接后的DNA轉(zhuǎn)化的細(xì)胞才能生長(zhǎng),所以zuì后得到的轉(zhuǎn)化子幾乎都是含有平末端DNA 插入片段的重組子。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1. 即用性,可以直接用于連接反應(yīng),免去繁瑣的酶切,電泳檢測(cè),純化,去磷酸化,再純化等步驟。
2. 具有Clion-G載體的所有優(yōu)點(diǎn),包括零背景,適用于所有E.Coli菌株,多拷貝的colEI型復(fù)制起始位點(diǎn)。
3.率,由于自殺基因的使用有效地減除了載體自身環(huán)化對(duì)平末端DNA 克隆的影響,自身環(huán)化得到的轉(zhuǎn)化子在有選擇液存在時(shí)只占總轉(zhuǎn)化子的1%-5%。
4. 應(yīng)用廣泛,可用于克隆酶切產(chǎn)生的平末端DNA,Pfu酶擴(kuò)增的PCR片段,cDNA片段,3′和5′RACE片段,Taq酶擴(kuò)增的PCR片段(部分為平末端)。
儲(chǔ)存條件:低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期兩年。
自備試劑:
1.外源DNA片段。如果含又DNA片段的反應(yīng)液中不含其他載體DNA(如酶切反應(yīng)液,PCR反應(yīng)液),可以不需要凝膠回收,滅活酶后即可直接將反應(yīng)液用于連接反應(yīng)。PCR引物5′端一般為OH基團(tuán),zuì好在PCR后用T4 激酶磷酸化,否則連接效率低。
2.感受態(tài)宿主菌。DH5α,DH10B或HB101等常用E.coli菌株。
3.連接反應(yīng)試劑。請(qǐng)購買現(xiàn)成試劑盒。
4. 選擇培養(yǎng)基。在倒LB 平板之前隨產(chǎn)品贈(zèng)送的選擇液和Amp(如果附贈(zèng)的選擇液含Amp,則不必須額外加Amp)按比例加入到LB 之中,使選擇液終濃度為1×,Amp 終濃度為50μg/mL(如果附贈(zèng)的選擇液含Amp,稀釋到1X后Amp的終濃度即為50μg/mL),混勻后倒盤。
使用方法:
1.連接反應(yīng)
a. 取新的經(jīng)過滅菌處理的0.5mL Eppendorf 管,編號(hào)。
b. 將100 ng載體DNA轉(zhuǎn)移到無菌離心管中,加兩倍摩爾量的外源DNA片段,折合成重量(ng)=(外源DNA片段bp 數(shù)X 100 ng×2)/5330bp(載體DNA 長(zhǎng)度)
c. 加蒸餾水至體積為8μl,于45℃保溫5分鐘,使重新退火的粘端解鏈。將混和物冷卻至0℃。平末端DNA片段的克隆可以省去45℃保溫5分鐘這一步。
d. 加入10×T4 DNA ligase buffer 1μl,T4 DNA ligase 0.5μl,混勻后用微量離心機(jī)將液體全部甩到管底,于16℃保溫1-24小時(shí)。
e. 同時(shí)做只有外源DNA片段沒有質(zhì)粒載體的組對(duì)照反應(yīng)。沒有必要做只有質(zhì)粒載體而無外源DNA的對(duì)照組,因?yàn)樽陨憝h(huán)化的載體不能生長(zhǎng),能夠生長(zhǎng)的轉(zhuǎn)化子基本上是兩個(gè)載體分子相互連接形成的新載體。但在有兩倍于外源DNA片段存在的情況下,兩個(gè)載體分子連接的機(jī)率很小。
2. E.coli感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化
a. 各取每組連接反應(yīng)液2μl按標(biāo)準(zhǔn)方法轉(zhuǎn)化E. coli感受態(tài)細(xì)胞。
b. 每組連接反應(yīng)轉(zhuǎn)化原液取100μl用無菌玻棒均勻涂布于篩選培養(yǎng)基上,37℃下培養(yǎng)半小時(shí)以上,直至液體被完全吸收。
MCS位點(diǎn):

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