酵母質(zhì)粒提取試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品僅用于生物化學(xué)研究方面，酵母質(zhì)粒提取試劑盒是我司眾多優(yōu)質(zhì)DNA提取純化之一，質(zhì)量堪比同類進(jìn)口產(chǎn)品，價(jià)格非常優(yōu)惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購(gòu)。...

特別提示：包括酵母質(zhì)粒提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：酵母質(zhì)粒提取試劑盒
英文名稱：Yeast Plasmid Extraction Kit
產(chǎn)品貨號(hào)：WE0165
產(chǎn)品規(guī)格：50次

  本試劑盒在普通堿裂解法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn)，全新的Lyticase可以有效的破除酵母細(xì)胞壁，硅基質(zhì)膜和緩沖液系統(tǒng)能專一的結(jié)合質(zhì)粒DNA，同時(shí)可以zuì大限度的去除蛋白及其他雜質(zhì)，整個(gè)過程方便快捷，不需使用有毒有害試劑，可以同時(shí)處理多個(gè)樣品。除適用于酵母細(xì)胞外，也可用于大腸桿菌。使用本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA可用于各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，如連接、轉(zhuǎn)化、測(cè)序和文庫(kù)篩選等。

試劑盒組成：

組份	50次
Buffer P1	15ml
Buffer P2	15ml
Buffer N3	20ml
Buffer PS	15ml
Buffer PB	10ml
Buffer PW(濃縮液)	10ml
Buffer EB	10ml
RNase A(10 mg/ml)	150μl
玻璃珠	2g
吸附柱DM及收集管	50套

自備試劑：無(wú)水乙醇，異丙醇。

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備及重要注意事項(xiàng)：
1、所有組分可在干燥、室溫(15～30℃)環(huán)境穩(wěn)定保存1年，將吸附柱置于2～8℃可保存更長(zhǎng)時(shí)間，加入RNase A的Buffer P1 置于2～8℃可穩(wěn)定保存6個(gè)月。
2、次使用前，將RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混勻，置于2–8℃保存。
3、次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明先在Buffer PW中加入無(wú)水乙醇。
4、使用前請(qǐng)檢查Buffer P2、Buffer N3是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀，如有結(jié)晶或者沉淀現(xiàn)象，可在37℃水浴幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。
5、注意不要直接接觸Buffer P2和Buffer N3，使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子。
6、提取的質(zhì)粒量與酵母菌株、質(zhì)?？截悢?shù)、培養(yǎng)條件等因素有關(guān)，通常酵母質(zhì)粒拷貝數(shù)都很低，通過電泳或分光光度計(jì)法都很難檢測(cè)到。

操作步驟：
1、取1-5ml酵母培養(yǎng)物(zuì多不超過5×107個(gè)酵母細(xì)胞，一般對(duì)于釀酒酵母OD600=1.0時(shí)，相當(dāng)于1-2×107細(xì)胞/ml)加入離心管(自備)中，12000rpm(~～13400×g)離心30秒，收集菌體沉淀，盡量吸棄上清。
2、向菌體中加入250μl Buffer P1(請(qǐng)先檢查是否已加入RNase A)，重懸沉淀。
3、在以上混合物中加入40 mg的玻璃珠(Glass Beads)，渦旋震蕩10分鐘。
4、向離心管中加入250μl Buffer P2，溫和地上下顛倒混勻6-8次，室溫放置5-10分鐘，此時(shí)菌液應(yīng)變得清亮粘稠。
注意：溫和混勻，不要?jiǎng)×艺鹗?，以免打斷基因組DNA，造成提取的質(zhì)粒中混有基因組DNA片段。如果溶液未變得清亮，提示可能菌量過大，裂解不徹底，應(yīng)減少菌體量。
5、向離心管中加入350μl Buffer N3，立即溫和地上下顛倒混勻6-8次，此時(shí)出現(xiàn)白色絮狀沉淀，12000rpm離心20分鐘。
注意：Buffer N3加入后應(yīng)立即混勻，避免產(chǎn)生局部沉淀。
6、柱平衡: 向已裝入收集管的吸附柱DM中加入200μl Buffer PS，12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
7、將步驟5所得上清加入到已裝入收集管的吸附柱中，注意不要吸出沉淀。
注意：吸附柱的zuì大容積為750μl，溶液分2次過柱。
8、12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
9、向吸附柱加入150μl Buffer PB，12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
10、向吸附柱中加入750μl Buffer PW(請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液。
11、將吸附柱重新放回收收集管中，12000rpm離心2分鐘，倒掉廢液。將吸附柱置于室溫?cái)?shù)分鐘，以徹底晾干。
注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余乙醇去除，乙醇?xì)埩魰?huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)(酶切、PCR等)。
12、將吸附柱置于一個(gè)新的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加50-100μl Buffer EB，室溫放置數(shù)分鐘，13000rpm離心1分鐘，將質(zhì)粒溶液收集到離心管中。-20℃保存質(zhì)粒。
注意：
1)為了增加質(zhì)粒的回收效率，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，室溫放置數(shù)分鐘，13000rpm離心1分鐘，將質(zhì)粒溶液收集到離心管中。
2)質(zhì)粒拷貝數(shù)較低或>10 kb時(shí)，Buffer EB在65-70℃水浴預(yù)熱，可以增加提取效率。
3)通常酵母質(zhì)?？截悢?shù)很低，通過電泳或者分光光度計(jì)法都很難檢測(cè)到。提取的質(zhì)粒如果用于下一步實(shí)驗(yàn)，通常建議使用量為：用作PCR模板可使用1–5μl質(zhì)粒，用于轉(zhuǎn)化大腸桿菌可使用5–10μl質(zhì)粒。
4)轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)應(yīng)使用商業(yè)化高轉(zhuǎn)化效率的感受態(tài)細(xì)胞。

儲(chǔ)存條件：室溫(15～30℃)

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名稱：白細(xì)胞裂解液
貨號(hào)：BTN130989
規(guī)格：250mL
本品為即用型白細(xì)胞裂解溶液，可以用于裂解分離純化好的血液白細(xì)胞，用于DNA提取、RNA提取等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：(以DNA提取為例)
1. 取新鮮抗凝血5mL，在10mL或15mL的塑料離心管中用紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞(紅細(xì)胞裂解液有幾種配方，用戶需要根據(jù)所選產(chǎn)品的使用手冊(cè)進(jìn)行操作，這里不列出每種的詳細(xì)步驟)，也可以直接2500rpm離心5分鐘后取白細(xì)胞層到一新的10mL或15mL的塑料離心管中。
2.在所得的白細(xì)胞沉淀中或所得白細(xì)胞層溶液中加自備的生理鹽水使得白細(xì)胞的終體積為2mL。
3. 加1mL的本產(chǎn)品，混勻后55℃ 保溫3小時(shí)，其間輕輕振搖數(shù)次。
4. 加入3mL自備的Tris飽和酚，輕輕震搖5分鐘，使得水相和酚相充分分開。
5. 3500rpm離心15分鐘，上層水相含DNA，中間白色層為蛋白質(zhì)，下層為酚相。
6. 將非常粘稠的含DNA的上清液轉(zhuǎn)移到一干凈的10mL或15mL的塑料離心管中。
7. 再用Tris飽和酚重復(fù)上面的抽提步驟，直到離心后中間層沒有白色的蛋白出現(xiàn)為止。
8.在上清液中加入等體積的自備的lǜ仿，輕輕震搖5分鐘，3500rpm離心5分鐘，轉(zhuǎn)移上清液到一干凈的10mL或15mL的塑料離心管中。此步可以除去殘留的酚。
9.在上清液中加入0.1倍體積的自備的3 M 乙酸鈉溶液(pH5.2)和2倍體積的無(wú)水乙醇，輕柔顛倒混勻，將出現(xiàn)絮狀的DNA沉淀。
10. 用移液槍頭將DNA沉淀挑取出來，轉(zhuǎn)移到1.5mL的塑料離心管中，用75%的乙醇浸泡2次。此操作可以去除DNA中殘留的鹽離子。
11.轉(zhuǎn)移DNA沉淀到一個(gè)1.5mL的塑料離心管中，空氣中放置10分鐘左右待乙醇揮發(fā)后，加入0.5mL自備的TE緩沖液溶解DNA，4℃放置待用。

名稱：非凍型組織DNA保存液
貨號(hào)：BTN3660
規(guī)格：250mL
本品是我公司推出的在室溫條件下長(zhǎng)期保存DNA樣品的保存液。它能迅速滲入細(xì)胞內(nèi)，通過抑制DNase的活性而長(zhǎng)期保證DNA的完整性。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 保存時(shí)間長(zhǎng)，可室溫保存動(dòng)植物組織長(zhǎng)達(dá)兩年，保護(hù)DNA不被降解。
2. 安全可靠，本產(chǎn)品無(wú)害，從DNA保存液保存的樣品中提得的DNA可用于酶切和PCR等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
3. 使用簡(jiǎn)單，直接把新鮮的動(dòng)植物樣品浸在DNA保存液中即可。
4.可廣泛用于各種動(dòng)植物標(biāo)本的野外采集。

儲(chǔ)存條件：室溫運(yùn)輸及保存，有效期兩年。

使用方法：

步：準(zhǔn)備工作
1.估計(jì)完全浸沒樣品所需要Tissue DNA保存液的體積。
注：1g 組織約需10mL Tissue DNA保存液。
2.標(biāo)記收集管并加入估計(jì)所需量的Tissue DNA保存液。

第二步：樣品的處理
1.以zuì快速度將樣品剪切成厚度小于0.5cm的碎塊。
注：鼠肝、腎和脾等小器官樣品和沒有蠟質(zhì)保護(hù)層的植物樣品可不需剪切而直接放入本產(chǎn)品中保存，有蠟質(zhì)保護(hù)層的植物樣品需要先將蠟表皮破壞。
2.將組織碎塊完全浸沒于收集管的Tissue DNA保存液中。

第三步：樣品的存放
將收集管存放于溫度適當(dāng)?shù)牡胤?，保存溫度不要低?℃。

第四步：樣品的使用
1.從存放處取出樣品，用消過毒的鑷子將組織碎塊從保護(hù)液中取出。
2.立即開始DNA提取。

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