KFS161 線粒體紫紅熒光探針

產(chǎn)品簡介
線粒體紫紅熒光探針由專業(yè)試劑供應(yīng)商北京百奧萊博提供,僅用于生物化學(xué)研究方面,我公司專注于探針標記及檢測產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng),為您提供的線粒體紫紅熒光探針質(zhì)量可靠,批間差小,且價格公道,熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。...
產(chǎn)品詳細介紹
特別提示:包括線粒體紫紅熒光探針在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:線粒體紫紅熒光探針
英文名稱:MitoDeedRed
產(chǎn)品貨號:KFS161
產(chǎn)品規(guī)格:100μL
具有細胞膜滲透性的MitoDeepRed(分子量543.58)探針包含一個溫和的巰基反應(yīng)性氯甲基基團,可用于標記線粒體,并在固定之后保留在線粒體內(nèi)。標記線粒體,細胞可以與MitoDeepRed 探針簡單孵育,探針通過被動擴散傳過質(zhì)膜,并在有活性的線粒體內(nèi)富集。一旦線粒體被標記,細胞再用醛基類固定劑固定之后,就可以進一步做下游實驗的深入處理。這些MitoDeepRed 染料可以解決一些致病性細胞上研究所面臨的困難,因為標記線粒體可以在細胞被固定之前開展。
雖然傳統(tǒng)的熒光染料,如四甲基羅丹明和羅丹明123,很容易識別功能性線粒體,但是這些染料一旦在線粒體去化時也很容易被洗滌出線粒體。這些缺點限制了常規(guī)染色實驗中所用的醛類固定劑,以及一些實驗用的處理藥品的選擇。而MitoView 染料可以很好的解決這一問題。
濃度:0.5mM in DMSO
儲存:-20℃,避光,有效期6個月
根據(jù)您的關(guān)注的線粒體紫紅熒光探針,您可能還對以下產(chǎn)品有需求:
名稱:隨機引物法DNA探針標記試劑盒
貨號:BTN90603A
規(guī)格:5次
本試劑盒是基于Feinberg和Vogelstein發(fā)明的隨機引物標記法而開發(fā)出來的即用型DNA探針標記試劑盒,標記過程由雙鏈DNA熱變性、隨機引物與單鏈DNA結(jié)合、在Klenow DNA聚合酶催化下,引物的延伸合成DNA探針并摻入標記的核苷酸三步組成,可用下面的示意圖表示:

本產(chǎn)品對Feinberg和Vogelstein經(jīng)典方法進行了改良。
產(chǎn)品特點:
1. 提供的標記反應(yīng)液整合了除酶和模板外的所有成分,簡化了反應(yīng)加樣步驟,提高了標記反應(yīng)的可重復(fù)性。
2. 使用無外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶,已標記DNA探針不會被酶降解。
3.快速,zuì快1小時即可完成標記反應(yīng)。
4. 得到的DNA探針比活性高(如果是同位素,可以達到109cpm/μg DNA),檢測靈敏度高。
5. 所需模版DNA量少(只需要10ng以上即可),DNA可以是各種形狀(線狀和環(huán)狀)的、也可以是單鏈或雙鏈的,長度在100bp以上均可。
6. 得到的探針長度在200-400nt之間,可以用于Southern雜交、Northern雜交、原位雜交、菌落和斑點印跡雜交等。
7. 提供三種標記選擇,其中BTN90603A可用于各種同位素標記和其他任何非同位素標記,但需自備標記底物;BTN90603B和BTN90603C可分別用于生物素和地gāo辛標記,不需自備標記底物。
試劑盒組成:
成分 | 規(guī)格 |
2×A型標記反應(yīng)液(自備標記物型) | 50μl(僅A型有) |
2×B型標記反應(yīng)液(生物素型) | 50μl(僅B型有) |
2×C型標記反應(yīng)液(DIG型) | 50μl(僅C型有) |
dATP,2mM | 10μL(僅A型有) |
dTTP,2mM | 10μL(僅A型有) |
dGTP,2mM | 10μL(僅A型有) |
dCTP,2mM | 10μL(僅A型有) |
Klenow exo-聚合酶(2U/μL) | 5μl |
超純水 | 1ml |
說明書 | 1份 |
儲存條件:低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
1.在一干凈的硅化的塑料離心管中加入下列成分:
成分 | 用量 |
模板DNA | 50-150ng |
2×標記反應(yīng)液(ABC三種之一) | 10μl |
超純水 | 補水到15μl |
注意:非同位素標記物由于疏水性強,容易與常用的塑料離心管表面非特異性結(jié)合,所以一定要使用硅化的塑料離心管。模板DNA并非越多越好,因為模板會在雜交反應(yīng)中跟標記的探針雜交,競爭性地抑制探針跟靶分子的雜交。
2. 沸水浴5-10分鐘,或在PCR儀上100℃加熱5-10分鐘使DNA模版充分變性,立即放冰上待用。注意:如果PCR儀器不能設(shè)置到100℃,99℃加熱5分鐘也可。
3.高速離心數(shù)秒使所有液體集中在管底,根據(jù)試劑盒類型加入下列成份:
試劑盒類型 | 成分及用量 |
BTN90603A型 |
dATP、dGTP、dCTP各1μl(共3μL,濃度均為2mM) 自備的2mM dTTP/標記dUTP混合物(見注)1μL 1μl Klenow exo聚合酶 |
BTN90603B型 |
1μl Klenow exo聚合酶 4μl超純水 |
BTN90603C型 |
1μl Klenow exo聚合酶 4μl超純水 |
注:上表中的dTTP/標記dUTP混合物中dTTP和標記的dUTP的總濃度為2mM(在20μL體系中混合液的終濃度為0.1mM,dTTP與生物素或DIG標記的dUTP的比例zuì好為65:35)。由于空間阻礙,并非標記生物素或DIG標記的dUTP越多靈敏度越高,一般dTTP與標記dUTP的比例在65:35為zuì佳。但如果使用自備的其他標記核苷酸,如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl標記的dUTP,則用戶需要自己摸索其與dTTP之間的zuì佳比例,如果使用32P標記的dUTP,則比活zuì好為3000Ci/mmol,濃度為好為10uCi/μL,并且不需要加入dTTP。
4. 輕柔吹打混勻。如有液滴沾在管壁上,高速離心數(shù)秒使所有液體集中在管底。
5. 37℃保溫1-20小時。標記效率跟模版量和保溫時間相關(guān),具體見下表:
模版DNA用量 | 1小時后探針合成量 | 20小時后探針合成量 |
10ng | 80ng | 900ng |
30ng | 150ng | 1.35μg |
100ng | 350ng | 1.65μg |
300ng | 750ng | 2.2μg |
1μg | 1.3μg | 2.6μg |
3μg | 1.6μng | 2.6μg |
6. 加1μl自備的0.5M EDTA(pH8.0)終止反應(yīng),立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要加熱100℃ 5分鐘使DNA探針變性成單鏈,然后直接加入到雜交反應(yīng)液中即可。如果電泳檢測,標記產(chǎn)物將是彌散狀態(tài)。
注意:本方法標記核苷酸摻入率高,因此可以不經(jīng)純化直接使用。如果需要純化,注意不要用酚抽提法純化非同位素(生物素、DIG和其他等)標記的DNA探針,因為這些標記分子疏水性強,能使標記的DNA進入疏水的有機相而丟失,但可以用乙醇沉淀和Sephadex G50回收(可另購非同位素探針柱式純化試劑盒)。對比活高的同位素探針,由于其其不穩(wěn)定,因此應(yīng)該立即使用,不要長久放置。
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