大提柱式質(zhì)粒DNA提取試劑盒是高品質(zhì)的DNA提取純化產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應，本產(chǎn)品用于科研目的，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價位合理，需要大提柱式質(zhì)粒DNA提取試劑盒等DNA提取純化產(chǎn)品的客戶，請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括大提柱式質(zhì)粒DNA提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：大提柱式質(zhì)粒DNA提取試劑盒
英文名稱：Mass-plasmid DNA column extraction kit
產(chǎn)品貨號：BTN80912
產(chǎn)品規(guī)格：5次

本試劑盒是用于質(zhì)粒DNA大量制備與純化的試劑盒。菌體先經(jīng)堿裂解法處理，再通過離心吸附柱，專一結合DNA，zuì后洗去雜質(zhì)，快速提取質(zhì)粒DNA，全套操作可以在30分鐘之內(nèi)完成。使用本試劑盒可從50-100mL 過夜培養(yǎng)的菌液純化得到高達300-500μg的高純度質(zhì)粒DNA(OD260/OD280= 1.8-2.0)，可以直接用于酶切、轉化、測序及PCR等。

試劑盒特點：
1．快速、步驟少，整個操作在半個小時之內(nèi)完成。
2．純度高，采用本試劑盒提取的質(zhì)粒OD 比值在1.8-2.0 之間。
3．產(chǎn)量高，每毫升過夜培養(yǎng)的細菌可以提取到2-5μg/mL。
4．用途廣，適用于低拷貝和高拷貝質(zhì)粒。
5．價格低，比多數(shù)同類產(chǎn)品的價格更。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	30ml
溶液B	30ml
RNase A溶液(10mg/mL)	0.15ml
溶液C	40ml
大提離心吸附柱	5套
通用洗柱液	100ml
DNA洗脫液2.0	10ml×2
說明書	1份

儲存條件：RNase A溶液需-20℃保存，其余成分可室溫或4℃保存，如有沉淀可加熱溶解后再使用。

使用方法：
1. 用250mL離心管收集100-300mL菌液，5000rpm離心10分鐘，去除上清。
2. 往細菌沉淀中加入6mL溶液A，充分振蕩懸浮(次使用時需要將RNase A溶液全部加入到溶液A中并混合均勻，未用完的、含RNase A的溶液A需放4℃保存)。注意：充分重懸細胞沉淀使之無細胞結塊狀物對于獲得高的質(zhì)粒產(chǎn)量十分重要。
3. 加入6mL溶液B，溫和翻轉10 余次至透明。若混合液不透明，應減少細菌的用量或室溫放置5-10分鐘直到裂解液變透明。注意: 避免劇烈振蕩，否則細菌基因組DNA 將斷裂為小片段，與質(zhì)粒難以分離，污染質(zhì)粒DNA。
4. 加入冰浴的8mL溶液C，顛倒混勻，冰上放置10分鐘。混合物中將有白色絮狀物形成。注意不要過分振蕩。
5. 6000rpm離心10分鐘。如果離心管承受能力強，離心速度還可以適當提高以充分沉淀絮狀物。
6. 將上清液(約20mL)轉移到離心吸附柱中，放入50mL 套管中。
7. 6000rpm離心5分鐘，質(zhì)粒DNA 將與離心吸附柱中的膜結合。棄穿透液。
8. 將10mL 通用洗柱液加入到離心吸附柱中，室溫靜置2分鐘后6000rpm離心5分鐘，棄穿透液。
9. 重復上步一次，即將10mL 通用洗柱液加入到離心吸附柱中，室溫靜置2分鐘后6000rpm離心5分鐘，棄穿透液。
10.室溫6000rpm 空甩5分鐘，棄穿透液。注意：此步對去除殘留通用洗柱液很重要，否則通用洗柱液會影響DNA的使用。
11. 將離心吸附柱放入一個自備的、干凈的50mL塑料離心管中，加1mL DNA洗脫液2.0(洗脫液如加熱到50-65℃效果更佳)，室溫靜置2分鐘后6000rpm離心5分鐘，收集液即是質(zhì)粒DNA溶液。
12. 本試劑盒中的離心吸附柱吸附能力較強，所以再用1mL DNA 洗脫液2.0洗脫3-4次才能把大部分質(zhì)粒DNA 洗脫下來。得到的RNA可以收集在一起立即使用或存放于-80℃待用。注：如果DNA 洗脫液不夠，可以用自備的DEPC 水代替。
 注：一般情況下，次洗脫可以洗脫約25%的質(zhì)粒DNA；第二次洗脫可以洗脫約35%的質(zhì)粒DNA；第三次洗脫可以洗脫約20%的質(zhì)粒DNA；第四次洗脫可以洗脫約10%的質(zhì)粒DNA；第五次洗脫可以洗脫約8%的質(zhì)粒DNA。
13. 合并所得質(zhì)粒DNA，立即使用或-20℃儲存。如果需要使用液相內(nèi)毒素清除劑清除質(zhì)粒DNA中的內(nèi)毒素，可以直接將此步所得的DNA溶液用于去內(nèi)毒素處理。如果DNA濃度太低，可以另購本公司的核酸濃縮劑進行濃縮。

注意事項：
1．細菌培養(yǎng)時間一般為12-16小時，但接種量大時應減少時間。過度培養(yǎng)會降低質(zhì)粒的質(zhì)量甚至導致質(zhì)粒DNA突變。
2．溶液A：溶液B：溶液C的比例為3：3：4。若細菌量增大，需按此比例放大這些溶液的使用量。
3．隨菌體增多應延長溶液B的作用時間，直至溶液成粘稠透明狀。但時間過長會導致質(zhì)粒DNA變性。
4．加溶液C后形成的白色沉淀中有變性的蛋白質(zhì)、細菌基因組DNA和細胞碎片，離心后應避免帶入到后續(xù)處理中。
5．通用洗柱液洗滌離心柱后必須甩干一次，否則殘留通用洗柱液中的乙醇會干擾后續(xù)實驗。
6．質(zhì)粒的具體產(chǎn)量跟細菌量、質(zhì)?？截悢?shù)、質(zhì)粒大小和操作規(guī)范程度密切相關。100mL高拷貝的菌液一般能得到700-1500ug質(zhì)粒DNA，100mL低拷貝的菌液一般能得到150-350ug質(zhì)粒DNA。
7．純化的質(zhì)粒在電泳中表現(xiàn)為2-3 條帶有時甚至為4-6 條帶均屬正常，未分開的環(huán)套質(zhì)粒，易被誤判為基因組DNA。

根據(jù)您的關注的大提柱式質(zhì)粒DNA提取試劑盒，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：



名稱：血液細胞核DNA和線粒體DNA共提試劑盒
貨號：BTN120810
規(guī)格：25次
本試劑盒是在本公司血液DNA提取試劑盒產(chǎn)品基礎上開發(fā)的、專門用于從新鮮或冷凍的哺乳動物抗凝全血中同時提取細胞核DNA和線粒體DNA的試劑。

產(chǎn)品特點：
1.一份樣品可以同時得到細胞核DNA和線粒體DNA，節(jié)約寶貴的實驗材料。
2. DNA產(chǎn)率高。細胞核DNA產(chǎn)率一般為30-50μg/mL 新鮮血液，線粒體DNA產(chǎn)率約為1μg/mL 新鮮血液。陳舊血液DNA產(chǎn)率差別較大。
3. DNA 純凈，OD260/OD280在1.8-2.0 之間，可直接用于PCR、酶切、雜交等實驗。
4.適用于哺乳動物血液，不適用于其他動物血液。
5. 所用試劑安全，健康環(huán)保。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
紅細胞裂解液D型	250mL
溶液A	25ml
溶液B	2ml
溶液C	5ml
DNA 洗脫液2.0	10ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸和保存，保存期限一年。

使用方法：

一：白細胞核和線粒體的分離
1. 將3mL 用EDTA 抗凝管收集的新鮮血液轉移到一個干凈的15mL塑料離心管中。注意：zuì好使用新鮮血液。對于陳舊血液，由于凍凝過程中冰晶已經(jīng)對細胞核膜和線粒體膜產(chǎn)生損傷，所以DNA 得率會大大減少，具體減少多少根據(jù)凍凝時間長短不同而不同。
2. 向血液中加入等體積(3mL)的D型紅細胞裂解液；輕柔顛倒數(shù)次混勻，室溫靜置10分鐘以裂解紅細胞和白細胞的細胞膜，直至溶液變成清澈的紅色。注意：D型紅細胞裂解液一旦打開后，非常容易污染細菌，未用完的部分zuì好-20℃保存，下次使用前，要溶解后充分搖勻。
3.室溫下1000 g離心10分鐘沉淀白細胞核。
4.轉移上清(含線粒體)到新的15mL塑料離心管中，注意不要觸及白細胞核沉淀。
5.在白細胞核沉淀中加入3mL D型紅細胞裂解液。輕柔顛倒數(shù)次混勻后，室溫下1000 g離心10分鐘以沉淀白細胞核。
6.轉移上清(含線粒體)到第4 步所得的、已經(jīng)含有上清的15mL塑料離心管中。
將白細胞核沉淀放置冰上，和即將準備好的線粒體一起用于DNA提取，也可以放置在-20℃待用。
7. 將匯集的含線粒體的上清于4℃下15000g離心30分鐘。
8.小心移棄上清，小心將線粒體沉淀重懸在1mL D型紅細胞裂解液中，然后轉移到1.5mL塑料離心管中，15000g離心5分鐘，移棄上清得到線粒體沉淀。
9. 用1mL D型紅細胞裂解液洗滌線粒體2次(每次先重懸線粒體，再15000g離心5分鐘得沉淀)。
10. 所得線粒體可以直接用于DNA提取，也可放置在-20℃待用。

二：DNA的提取(下面步驟為白細胞核DNA提取和線粒體DNA提取通用)
11.在白細胞沉淀或線粒體沉淀中加入0.5mL溶液A，用移液槍吹打數(shù)次混勻后再加入75μL溶液B，混勻后于55℃溫育10分鐘。注意：溶液將成渾濁狀。
12. 再加入0.2mL溶液C充分顛倒混勻。
13.在4℃下13000g離心20分鐘后，將上清(含DNA)轉入一新的1.5mL塑料離心管中。
14. 加入兩倍體積的自備無水乙醇充分震蕩混勻后，室溫13000 g離心5分鐘，去盡上清。
15. 加入1mL 75%乙醇，充分混勻后室溫13000g離心5分鐘，去盡上清。
16. 重復上步一次。
17. 短暫離心，去盡殘留溶液(此步十分重要，不要省略)。
18. 短暫晾干半分鐘，加入適量DNA 洗脫液2.0 溶解DNA(對細胞核DNA，可加入500μL DNA 洗脫液2.0，對線粒體DNA，可加入50μL DNA 洗脫液2.0)。
19. 65℃保溫15分鐘以便徹底溶解DNA沉淀。溶解后的DNA可以立即用于后續(xù)的OD 檢測、酶切、PCR或其他實驗，也可以放置在-20℃長期保存。

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