北京百奧萊博供應(yīng)的DNA分選純化磁珠用于科學(xué)研究，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多DNA分選純化磁珠等DNA提取純化產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括DNA分選純化磁珠在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：DNA分選純化磁珠
英文名稱：DNA Size Selection Beads
產(chǎn)品貨號：WH0199
產(chǎn)品規(guī)格：15ml|60ml|300ml

本制品是一款可以用于DNA片段分選和DNA產(chǎn)物純化的核酸純化產(chǎn)品。采用高性能磁珠和獨特緩沖液體系，通過調(diào)整磁珠與樣本的比例，無需割膠即可實現(xiàn)100 bp～1000 bp的雙鏈及單鏈DNA片段的分選及純化。使用本試劑盒可有效去除反應(yīng)體系中的dNTP、鹽離子及有機雜質(zhì)等，所得DNA片段純度高，回收效率可達90%以上?？蓮V泛應(yīng)用于NGS文庫構(gòu)建中特定長度DNA片段的分選與純化。

產(chǎn)品特點：
·：DNA片段純化得率高，效率可達90%。
·簡便：無需割膠，自由選擇所分選DNA片段的長度。
·兼容：兼容手工操作或自動化工作站的高通量操作。

適用范圍：
高通量測序文庫構(gòu)建中DNA片段的分選及純化，PCR反應(yīng)體系、酶切及連接反應(yīng)體系中DNA的純化，游離核酸篩選，核酸提取過程中小片段DNA的去除等。

產(chǎn)品組成：

組分	WH0199-1	WH0199-2
磁珠結(jié)合液DM	15ml	4×15ml
洗脫緩沖液TB	15ml	2×15ml

儲存條件：2-8℃保存一年。

注意事項：請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。
1．磁珠結(jié)合液DM于4℃儲存，避免凍存，實驗前將磁珠結(jié)合液DM從4℃取出，室溫放置20分鐘使磁珠平衡至室溫。
2．由于部分反應(yīng)體系中的成分可能會對分選片段的長度產(chǎn)生影響，因此需要根據(jù)具體情況調(diào)整所加入磁珠的體積。
3．純化小的DNA片段（≤200bp），可加入1.4倍或1.8倍的磁珠結(jié)合液DM進行純化回收，提高回收效率。
4．所使用的80%乙醇需自行準(zhǔn)備，建議現(xiàn)用現(xiàn)配，且在使用80%乙醇進行洗滌的過程中，不要將試管從磁力架上轉(zhuǎn)移。

DNA濃度及純度檢測：
純化回收的DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和DNA Chips檢測濃度與片段大小。

操作步驟：

一、DNA片段分選步驟
本操作步驟適合酶切處理或超聲打斷基因組文庫構(gòu)建過程中片段的分選和純化。

1．將平衡至室溫的磁珠結(jié)合液DM振蕩混勻，取適當(dāng)體積的磁珠結(jié)合液DM加入待分選的DNA片段中充分混勻（加入磁珠結(jié)合液DM的體積可參照表1），室溫靜置5min （期間混勻一次)。
  表1：DNA片段分選推薦磁珠結(jié)合液DM用量

打斷片段平均長度（bp)		~100	~200	~300	~480	~780
文庫片段平均長度（bp) （打斷片段+接頭)		~220	~320	~420	~600	~900
磁珠用量	次篩選	0.7倍	0.6倍	0.5倍	0.4倍	0.3倍
	第二次篩選	0.1倍	0.1倍	0.1倍	0.1倍	0.1倍

2．瞬時離心將溶液離心至管底，將離心管放置于磁力架上靜置2～5min，待磁珠完全吸附后轉(zhuǎn)移上清至新的離心管中（切勿吸到磁珠，建議留存2～3μl上清），棄磁珠。
3．加入轉(zhuǎn)移上清體積0.1倍的磁珠結(jié)合液DM，充分混勻后室溫靜置5min（期間混勻一次）。
4．將離心管放置于磁力架上吸附2～5min，待磁珠完全貼壁后，用移液器小心去除上清。
  注意：步驟4、5和6均需在磁力架上操作，切勿將離心管從磁力架上移開。
5．向步驟4的離心管中加入200 μl 80%乙醇溶液（現(xiàn)用現(xiàn)配），輕輕吹打3～5次（不要吹打磁珠），磁力架上靜置2 min，用移液器小心去除上清。
6．重復(fù)步驟5一次。
7．用移液器盡量去除液體，室溫晾干2～5min，將離心管從磁力架上取下，加入25 μl洗脫緩沖液TB，用槍吹打3～5次充分混勻，室溫靜置3～5min。
  注意：磁珠在室溫晾干切勿超過5min，過度干燥嚴(yán)重影響洗脫效率，45℃加熱洗脫可以提高洗脫效率。
8．將離心管放置于磁力架上靜置2～5min，待磁珠完全吸附后，將上清轉(zhuǎn)移至一個新離心管中，并于適當(dāng)條件保存，或直接用于NGS文庫構(gòu)建的PCR富集反應(yīng)。

二、PCR富集后文庫的純化步驟
1．向PCR反應(yīng)產(chǎn)物中加入1倍體積的磁珠結(jié)合液DM充分混勻，室溫靜置5min （期間混勻一次)。
2．將離心管放置于磁力架上吸附2～5min，待磁珠完全吸附后，棄上清。
  注意：步驟2、3和4均需在磁力架上操作，切勿將離心管從磁力架上移開，切勿吹散磁珠。
3．離心管放置于磁力架上，加入200 μl 80%乙醇溶液（現(xiàn)用現(xiàn)配），輕輕吹打3～5次（不要吹打磁珠），磁力架上靜置2～5min，小心吸棄上清。
4．重復(fù)步驟3一次。
5．用移液器盡量去除液體，室溫晾干2～5min，將離心管從磁力架上取下，加入適當(dāng)體積的洗脫緩沖液TB，用槍吹打3～5次，室溫靜置3～5min。
  注意：磁珠在室溫晾干切勿超過5min，過度干燥嚴(yán)重影響洗脫效率，45℃加熱洗脫可以提高洗脫效率。
6．將離心管放置于磁力架上靜置2～5min，磁珠完全吸附后，將上清轉(zhuǎn)移至一個新離心管中，并于-20℃保存。

三、無需分選的DNA純化步驟
本操作步驟適合于無需片段分選的文庫構(gòu)建過程中DNA的純化（如游離核酸測序文庫等)。

1．將DNA溶液轉(zhuǎn)移到1.5ml離心管中，將磁珠振蕩混勻，加入1倍體積的磁珠結(jié)合液DM充分混勻，室溫靜置5min（期間混勻一次）。
2．將離心管放置于磁力架上靜置2～5min，待磁珠完全吸附后棄上清。
  注意：步驟2、3和4中切勿將離心管從磁力架上移開，切勿吹散磁珠。
3．將離心管放置于磁力架上，加入200 μl 80%乙醇（現(xiàn)用現(xiàn)配），輕輕吹打3～5次（不要吹打磁珠），磁力架上靜置2～5min，小心去除液體。
4．重復(fù)步驟3一次。
5．用移液器盡量去除液體，室溫晾干2～5min，將離心管從磁力架上取下，加入25 μl洗脫緩沖液TB，用槍吹打3～5次，室溫洗脫3～5min，轉(zhuǎn)移上清至新的離心管中，于適當(dāng)條件保存，或直接用于NGS文庫構(gòu)建的PCR富集反應(yīng)。
  注意：磁珠在室溫晾干切勿超過5min，過度干燥嚴(yán)重影響洗脫效率，45℃加熱洗脫可以提高洗脫效率。
6．PCR富集后文庫的純化參照步驟二。

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名稱：柱式石蠟包埋組織DNA提取試劑盒
貨號：BTN130934
規(guī)格：30次

名稱：酵母質(zhì)粒提取試劑盒
貨號：WE0165
規(guī)格：50次
  本試劑盒在普通堿裂解法的基礎(chǔ)上進行了改進，全新的Lyticase可以有效的破除酵母細(xì)胞壁，硅基質(zhì)膜和緩沖液系統(tǒng)能專一的結(jié)合質(zhì)粒DNA，同時可以zuì大限度的去除蛋白及其他雜質(zhì)，整個過程方便快捷，不需使用有毒有害試劑，可以同時處理多個樣品。除適用于酵母細(xì)胞外，也可用于大腸桿菌。使用本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA可用于各種分子生物學(xué)實驗，如連接、轉(zhuǎn)化、測序和文庫篩選等。

試劑盒組成：

組份	50次
Buffer P1	15ml
Buffer P2	15ml
Buffer N3	20ml
Buffer PS	15ml
Buffer PB	10ml
Buffer PW(濃縮液)	10ml
Buffer EB	10ml
RNase A(10 mg/ml)	150μl
玻璃珠	2g
吸附柱DM及收集管	50套

自備試劑：無水乙醇，異丙醇。

實驗前準(zhǔn)備及重要注意事項：
1、所有組分可在干燥、室溫(15～30℃)環(huán)境穩(wěn)定保存1年，將吸附柱置于2～8℃可保存更長時間，加入RNase A的Buffer P1 置于2～8℃可穩(wěn)定保存6個月。
2、次使用前，將RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混勻，置于2–8℃保存。
3、次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明先在Buffer PW中加入無水乙醇。
4、使用前請檢查Buffer P2、Buffer N3是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀，如有結(jié)晶或者沉淀現(xiàn)象，可在37℃水浴幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。
5、注意不要直接接觸Buffer P2和Buffer N3，使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子。
6、提取的質(zhì)粒量與酵母菌株、質(zhì)?？截悢?shù)、培養(yǎng)條件等因素有關(guān)，通常酵母質(zhì)粒拷貝數(shù)都很低，通過電泳或分光光度計法都很難檢測到。

操作步驟：
1、取1-5ml酵母培養(yǎng)物(zuì多不超過5×107個酵母細(xì)胞，一般對于釀酒酵母OD600=1.0時，相當(dāng)于1-2×107細(xì)胞/ml)加入離心管(自備)中，12000rpm(~～13400×g)離心30秒，收集菌體沉淀，盡量吸棄上清。
2、向菌體中加入250μl Buffer P1(請先檢查是否已加入RNase A)，重懸沉淀。
3、在以上混合物中加入40 mg的玻璃珠(Glass Beads)，渦旋震蕩10分鐘。
4、向離心管中加入250μl Buffer P2，溫和地上下顛倒混勻6-8次，室溫放置5-10分鐘，此時菌液應(yīng)變得清亮粘稠。
注意：溫和混勻，不要劇烈震蕩，以免打斷基因組DNA，造成提取的質(zhì)粒中混有基因組DNA片段。如果溶液未變得清亮，提示可能菌量過大，裂解不徹底，應(yīng)減少菌體量。
5、向離心管中加入350μl Buffer N3，立即溫和地上下顛倒混勻6-8次，此時出現(xiàn)白色絮狀沉淀，12000rpm離心20分鐘。
注意：Buffer N3加入后應(yīng)立即混勻，避免產(chǎn)生局部沉淀。
6、柱平衡: 向已裝入收集管的吸附柱DM中加入200μl Buffer PS，12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
7、將步驟5所得上清加入到已裝入收集管的吸附柱中，注意不要吸出沉淀。
注意：吸附柱的zuì大容積為750μl，溶液分2次過柱。
8、12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
9、向吸附柱加入150μl Buffer PB，12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
10、向吸附柱中加入750μl Buffer PW(請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液。
11、將吸附柱重新放回收收集管中，12000rpm離心2分鐘，倒掉廢液。將吸附柱置于室溫數(shù)分鐘，以徹底晾干。
注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余乙醇去除，乙醇?xì)埩魰绊懞罄m(xù)的酶促反應(yīng)(酶切、PCR等)。
12、將吸附柱置于一個新的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加50-100μl Buffer EB，室溫放置數(shù)分鐘，13000rpm離心1分鐘，將質(zhì)粒溶液收集到離心管中。-20℃保存質(zhì)粒。
注意：
1)為了增加質(zhì)粒的回收效率，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，室溫放置數(shù)分鐘，13000rpm離心1分鐘，將質(zhì)粒溶液收集到離心管中。
2)質(zhì)粒拷貝數(shù)較低或>10 kb時，Buffer EB在65-70℃水浴預(yù)熱，可以增加提取效率。
3)通常酵母質(zhì)?？截悢?shù)很低，通過電泳或者分光光度計法都很難檢測到。提取的質(zhì)粒如果用于下一步實驗，通常建議使用量為：用作PCR模板可使用1–5μl質(zhì)粒，用于轉(zhuǎn)化大腸桿菌可使用5–10μl質(zhì)粒。
4)轉(zhuǎn)化大腸桿菌時應(yīng)使用商業(yè)化高轉(zhuǎn)化效率的感受態(tài)細(xì)胞。

儲存條件：室溫(15～30℃)

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