質(zhì)粒小量提取試劑盒是高品質(zhì)的DNA提取純化產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于科學(xué)研究，我公司的質(zhì)粒小量提取試劑盒品質(zhì)上佳，經(jīng)過(guò)多年的開(kāi)發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購(gòu)。...

特別提示：包括質(zhì)粒小量提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：質(zhì)粒小量提取試劑盒
英文名稱：Plasmid small quantity extraction kit
產(chǎn)品貨號(hào)：MT0048
產(chǎn)品規(guī)格：100T

本試劑盒采用了一種的離子交換柱，在特定條件下，使質(zhì)粒能在離心過(guò)柱的瞬間結(jié)合到質(zhì)粒純化柱上，在一定條件下又能將質(zhì)粒充分洗脫，從而實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒的快速純化。該質(zhì)粒提取試劑盒采用改進(jìn)的質(zhì)粒抽提系統(tǒng)，徹底解決了RNA污染的問(wèn)題。的離子交換柱具有高達(dá)40μg的結(jié)合能力，每個(gè)純化柱可用于抽提1-5ml LB培養(yǎng)過(guò)夜的大腸桿菌菌液，抽提所得的質(zhì)粒的OD值一般在1.80左右。 由本試劑盒抽提所得的質(zhì)?？芍苯佑糜谵D(zhuǎn)化、DNA測(cè)序、PCR、基于PCR的突變、體外轉(zhuǎn)錄、酶切等。

產(chǎn)品組成：

組分	規(guī)格
Buffer A(重懸液)	25ml
Buffer B(裂解液)	25ml
Buffer C(結(jié)合液)	30ml
Washing Buffer(洗滌液)	20ml
Elution Buffer(洗脫液)	10ml
RNaseA(20mg/ml)	0.5ml
吸附柱及套管	100套

保存條件：室溫避光保存，有效期2年。(RNase A置于-20℃保存)

操作方法：

1．取過(guò)夜培養(yǎng)的菌液 1.8ml 加入到 2ml EP管中，13000rpm 室溫離心1分鐘 后收集細(xì)菌沉淀。倒掉上清液，可再次加入菌液 1.8ml，離心后去除上清液。
2．每管加入250μl Buffer A（確認(rèn)已經(jīng)加入RNase A），用吸頭吹打沉淀菌體至無(wú)可見(jiàn)細(xì)菌團(tuán)塊，以確保沉淀完全散開(kāi)。
3．每管加入250μl Buffer B，輕輕顛倒離心管 4～6 次，室溫放置 2 分鐘，使細(xì)菌完全裂解，溶液應(yīng)變的透明。切勿劇烈振蕩，否則會(huì)導(dǎo)致基因組DNA 斷裂，從而導(dǎo)致所得質(zhì)粒被基因組DNA 污染。
4．每管加入350μl Buffer C，隨即顛倒離心管 4～6 次混勻(切勿劇烈振蕩)，可見(jiàn)白色絮狀物產(chǎn)生，室溫靜置 1分鐘。
5．手腕用力上下振蕩 4～6 次，使白色絮狀物振散，然后置于離心機(jī)上 13000rpm 室溫離心10分鐘。
6．將上一步驟離心后的上清倒入或吸入到質(zhì)粒純化柱內(nèi)，13000rpm離心30s，倒棄收集管內(nèi)液體。(切勿吸入白色沉淀，否則會(huì)堵塞離心柱)。
7．在質(zhì)粒純化柱內(nèi)加入500μl Washing Buffer(務(wù)必確認(rèn)已加入無(wú)水乙醇)，13000rpm 室溫離心30s，洗去雜質(zhì)，倒棄收集管內(nèi)液體。
8．重復(fù)步驟7 一次。
9．將吸附柱重新放入套管中，13000rpm 室溫空離心2分鐘。
10．將質(zhì)粒純化柱置于新的1.5ml離心管上，靜置 2分鐘，使痕量乙醇完全揮發(fā)，加入80-120μl Elution Buffer 至管內(nèi)柱面上，放置 1分鐘。Elution Buffer 使用前zuì好 50℃ 水浴預(yù)熱。
11．13000rpm 室溫離心2分鐘，所得液體即為高純度質(zhì)粒。

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貨號(hào)	名稱	規(guī)格
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名稱：DNA產(chǎn)物快速純化試劑盒
貨號(hào)：WE0170
規(guī)格：50次|200次
  本試劑盒采用硅基質(zhì)膜技術(shù)和試劑配方，通過(guò)離心吸附柱快速簡(jiǎn)單的結(jié)合-洗滌-洗脫三步即可從PCR產(chǎn)物或酶反應(yīng)液(酶切，連接，探針標(biāo)記等)中純化回收100 bp-10 kb的DNA片段，每個(gè)吸附柱zuì高可吸附10μg的DNA，同時(shí)zuì大限度的去除引物、寡核苷酸、酶等雜質(zhì)。純化回收的DNA純度及濃度高，完整性好，回收率高，可直接用于測(cè)序、連接和轉(zhuǎn)化、標(biāo)記、體外轉(zhuǎn)錄等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

試劑盒組成：

組份	50次	200次
Buffer PB	30ml	120ml
Buffer PS	15ml	60ml
Buffer PW(濃縮)	6ml	25ml
Buffer EB	10ml	30ml
離心吸附柱DM及收集管	50套	200套

產(chǎn)品特點(diǎn)
1、快速簡(jiǎn)單：操作步驟少，15分鐘完成，同時(shí)可處理多個(gè)樣品，節(jié)省時(shí)間。
2、回收率高：硅基質(zhì)膜技術(shù)和試劑配方保證每次zuì大量回收到純度高的目的DNA。
3、處理量大：每個(gè)離心吸附柱每次zuì多可吸附的DNA 量為10μg。

自備試劑：無(wú)水乙醇。

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備及重要注意事項(xiàng)：
1、所有組分可在干燥、室溫(15～30℃)環(huán)境穩(wěn)定保存1年，更長(zhǎng)時(shí)間保存可置于2- 8℃。當(dāng)溶液低溫保存時(shí),使用前需在室溫中放置一段時(shí)間，恢復(fù)至室溫后使用。
2、本試劑盒可無(wú)選擇性回收溶液中所有DNA片段，如需選擇性回收特定片段，同時(shí)去除其他不同大小片段，請(qǐng)選擇我公司的膠回收試劑盒(WE0168)
3、次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說(shuō)明在Buffer PW中加入無(wú)水乙醇。
4、使用前請(qǐng)檢查Buffer PB是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀，如有結(jié)晶或者沉淀現(xiàn)象，可在37℃水浴幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。
5、回收效率與初始DNA量和洗脫體積有關(guān)，初始量越少，洗脫體積越少，回收率越低。
6、所有離心步驟均可室溫下進(jìn)行。

操作步驟：
1、估計(jì)DNA反應(yīng)液的體積，加入5倍體積的 Buffer PB，充分混勻(無(wú)需去除石蠟油或礦物油)。
注意：
1)如DNA反應(yīng)體系為50μl(不包括石蠟油體積)，則加入250μl Buffer PB。
2)在加入Buffer PB后檢測(cè)溶液的pH值，若pH值＞7.5，可向其中加入10-30μl的3 M醋酸鈉(pH5.0)，從而將pH值調(diào)到5-7。
2、柱平衡：向已裝入收集管中的吸附柱DM中加入200μl Buffer PS，13000rpm(~～～16200×g)離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
3、將步驟1中所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中，室溫放置1分鐘，13000rpm離心30-60 s，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
注意：吸附柱容積為750μl，若樣品體積大于750μl可分批加入 。
4、向吸附柱中加入500μl Buffer PW(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)13000rpm離心30-60 s，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
注意：如果純化的DNA用于鹽敏感實(shí)驗(yàn)(例如平末端連接實(shí)驗(yàn)或直接測(cè)序)，建議加入Buffer PW后靜置2-5分鐘再離心。
5、13000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫?cái)?shù)分鐘，以徹底晾干。
注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)(酶切、PCR等)。為確保下游實(shí)驗(yàn)不受殘留乙醇的影響，建議將吸附柱開(kāi)蓋，置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的乙醇。
6、將吸附柱放到一個(gè)新離心管(自備)中，向吸附膜中間位置懸空滴加30-50μl Buffer EB，室溫放置1分鐘。13000rpm離心1分鐘，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
注意：
1)洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液，應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5之間(可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍)。
2)為了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重新加到吸附柱中，室溫放置2分鐘，13000rpm離心1分鐘。
3)洗脫體積不應(yīng)小于30μl，體積過(guò)少會(huì)影響回收效率。
4)回收＞10 kb的DNA片段時(shí)，Buffer EB應(yīng)在50℃水浴中預(yù)熱，適當(dāng)延長(zhǎng)吸附和洗脫時(shí)間，可增加回收效率。

儲(chǔ)存條件：室溫(15～30℃)。

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