北京百奧萊博供應(yīng)的高純質(zhì)粒小提試劑盒用于科研目的，我公司的高純質(zhì)粒小提試劑盒品質(zhì)上佳，經(jīng)過(guò)多年的開(kāi)發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購(gòu)。...

特別提示：包括高純質(zhì)粒小提試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：高純質(zhì)粒小提試劑盒
英文名稱：PlaPure Mini Extraction Kit
產(chǎn)品貨號(hào)：WE0162
產(chǎn)品規(guī)格：50次|200次

  本試劑盒提供一種簡(jiǎn)單、快捷、的提取質(zhì)粒的方法，在堿裂解法裂解細(xì)胞的基礎(chǔ)上，采用獨(dú)特的硅基質(zhì)膜吸附技術(shù)和試劑配方，通過(guò)離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下專一的結(jié)合溶液中的質(zhì)粒DNA，經(jīng)過(guò)兩步洗滌，一步洗脫，zuì大限度的去除蛋白質(zhì)、基因組、RNA和其他雜質(zhì)。得到的質(zhì)粒DNA可直接用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染、PCR、酶切、測(cè)序、連接等生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

試劑盒組成：

組份	50次	200次
Buffer P1	15ml	60ml
Buffer P2	15ml	60ml
Buffer N3	20ml	80ml
Buffer PB	10ml	35ml
Buffer PW(濃縮液)	6ml	25ml
Buffer EB	10ml	30ml
RNase A(10mg/ml)	150μl	600μl
吸附柱DM及收集管	50套	200套

自備試劑：無(wú)水乙醇。

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備及重要注意事項(xiàng)：
1、所有組分可在干燥、室溫(15～30℃)環(huán)境穩(wěn)定保存1年，將吸附柱置于2～8℃可保存更長(zhǎng)時(shí)間，加入RNase A的Buffer P1 置于2～8℃可穩(wěn)定保存6個(gè)月。
2、次使用前，將RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混勻，置于2–8℃保存，使用前需在室溫中放置一段時(shí)間，恢復(fù)至室溫后使用。
3、次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說(shuō)明在Buffer PW中加入無(wú)水乙醇。
4、使用前若發(fā)現(xiàn)Buffer P2、Buffer N3、Buffer PB有沉淀，可在37℃水浴幾分鐘，即可恢復(fù)澄清(請(qǐng)勿劇烈晃動(dòng)Buffer P2)。
5、注意不要直接接觸Buffer P2 、Buffer N3和 Buffer PB，使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子。
6、提取質(zhì)粒的量和純度與細(xì)菌培養(yǎng)濃度、菌株種類、質(zhì)粒大小、質(zhì)?？截悢?shù)等因素有關(guān)。

操作步驟：
1、取1-5ml過(guò)夜培養(yǎng)的菌液加入離心管(自備)中，13000rpm(~～16200×g)離心30秒收集菌體沉淀，盡量吸棄上清。
2、向留有菌體沉淀的離心管中加入250μl Buffer P1(請(qǐng)先檢查是否已加入RNase A)，使用移液器或渦旋振蕩器充分混勻，懸浮菌體沉淀。
注意：如果菌塊未徹底混勻，將會(huì)影響裂解效果，導(dǎo)致提取量和純度偏低。
3、向離心管中加入250μl Buffer P2，溫和地上下顛倒混勻4-6次，充分混勻使菌體裂解，此時(shí)溶液應(yīng)變得清亮粘稠。
注意：溫和混勻，不要?jiǎng)×艺鹗帲悦獯驍嗷蚪MDNA，造成提取的質(zhì)粒中混有基因組DNA片段。此步驟所用時(shí)間應(yīng)不超過(guò)5分鐘，避免質(zhì)粒受到破壞。
4、向離心管中加入350μl Buffer N3，立即溫和地上下顛倒混勻8-10次，充分混勻，此時(shí)應(yīng)出現(xiàn)白色絮狀沉淀。13000rpm離心5分鐘。
注意：Buffer N3加入后應(yīng)立即混勻，避免產(chǎn)生局部沉淀。
5、將步驟4中所得的上清液轉(zhuǎn)移到已裝入收集管的吸附柱DM中，13000rpm離心30秒鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
6、向吸附柱中加入150μl Buffer PB，13000rpm離心30秒。
7、向吸附柱中加入400μl Buffer PW(請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，13000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液。
8、將吸附柱置于一個(gè)新的離心管(自備)中，向吸附膜的中間部位加入50-100μl Buffer EB，室溫放置2分鐘，13000rpm離心1分鐘，將質(zhì)粒溶液收集到離心管中。-20℃保存質(zhì)粒。
注意：
1)為了增加質(zhì)粒的回收效率，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，室溫放置2分鐘，13000rpm離心1分鐘，將質(zhì)粒溶液收集到離心管中。
2)質(zhì)?？截悢?shù)較低或>10 kb時(shí)， Buffer EB在65-70℃水浴預(yù)熱，可以增加提取效率。

儲(chǔ)存條件：室溫(15～30℃)。


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