酵母線粒體DNA提取試劑盒是高品質(zhì)的DNA提取純化產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應，本產(chǎn)品用于生化實驗研究等領域，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價位合理，需要酵母線粒體DNA提取試劑盒等DNA提取純化產(chǎn)品的客戶，請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括酵母線粒體DNA提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：酵母線粒體DNA提取試劑盒
英文名稱：Yeast Mitochondrial DNA Extraction Kit
產(chǎn)品貨號：XH006
產(chǎn)品規(guī)格：50T|100T

本試劑盒用于從酵母中分離出完整而純化的線粒體DNA。利用差速離心得到比較純凈的線粒體，再利用DNA酶消化和裂解緩沖系統(tǒng)等多步驟去掉核DNA，zuì后得到純凈的線粒體DNA?？捎糜赑CR等對純度要求較高的實驗。

試劑盒組成：

組份	50T	100T	保存溫度
DNase I	12mg	22mg	-20℃溶解后分裝
RNase A	0.5ml	1ml	-20℃保存經(jīng)常使用可2～8℃放置
蝸牛酶	500mg	1g	-20℃
β-巰基乙醇	1.0ml	1.0ml	RT
山梨醇緩沖液	30ml	60ml	2～8℃
原生質(zhì)體裂解液	100mL	200 mL	2～8℃
線粒體清洗液	25 mL	50 mL	2～8℃
DNA酶反應液	6ml	12ml	2～8℃
線粒體裂解液	10ml	20ml	常溫放置， 如有沉淀可37℃水浴
蛋白沉淀液	7.5ml	15ml	2～8℃
核酸助沉劑	0.5ml	1ml	2～8℃
TE緩沖液	25ml	50ml	2～8℃

保存條件：2～8℃可保存一年，DNASE I、RNase A和蝸牛酶-20℃保存。使用前，在DNASE I中加入600μl（50T）或者1100μl（100T）的DNA酶反應液，分裝后-20℃保存三個月，如果超過三個月，活性可能會降低，請自行訂購DNASE I。線粒體裂解液使用前常溫保存，如有沉淀可37℃水浴溶解，不影響使用。

操作步驟：
準備工作：在DNASE I中加入600μl（50T）或者1100μl（100T）的DNA酶反應液，適當分裝后-20℃保存。線粒體裂解液保存于常溫，如有沉淀37℃水浴溶解，離心機溫度下降到4℃（2～8℃），如無低溫離心機，也可以常溫離心，并將離心時間減半，但zuì后所得DNA品質(zhì)及產(chǎn)量可能會有一定影響。

1．取新鮮培養(yǎng)的1-5ml酵母培養(yǎng)物(約5×10⁷細胞，濕重50mg或者50μl體積)離心后的收集物（4℃，1000×g離心5min）。雙蒸水洗一到兩次。離心，盡量棄上清。取50μl山梨醇緩沖液洗一次，離心，棄上清。
2．酵母沉淀用0.5ml山梨醇緩沖液重懸，加入10mg蝸牛酶，再加入5μl β-巰基乙醇，混勻（如果一次提取樣本較多，可取0.5ml山梨醇緩沖液重懸，加入10mg蝸牛酶，再加入5μl β-巰基乙醇預混勻，混勻后每管樣本加入0.5ml重懸酵母），30℃水浴1-2小時。4℃，1000×g離心5min，棄上清，得到原生質(zhì)體。將得到的原生質(zhì)體用0.5ml原生質(zhì)體裂解液重懸，再次離心，棄上清，得到原生質(zhì)體。
3．將得到的原生質(zhì)體用0.5ml原生質(zhì)體裂解液重懸，并轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)，0℃冰浴研磨10~20次；
4．將研磨物放置合適的離心管，4℃，1000×g離心5min；
5．取上清，加入一新的離心管中，4℃，16,000×g離心10min。離心后的上清含胞漿成分，可從中提取胞漿蛋白。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管，線粒體沉淀在管底。
6．在線粒體沉淀中加入0.5 mL線粒體清洗液重懸線粒體沉淀，4℃，1000×g離心5min；取上清，加入一新的離心管中，4℃，16,000×g離心10min。棄上清，高純度的線粒體沉淀在管底；
7．加入100μl DNA酶反應液重懸線粒體，吹打均勻后，再加入10μl DNASE I溶液（見準備工作），混勻，37℃水浴10min。此步為消化線粒體表面吸付的核DNA。4℃，16,000×g離心5min。盡可能的棄上清，再加入200μl TE重懸線粒體沉淀，4℃，16,000×g離心5min，洗去殘留的DNA酶。
8．得到的沉淀，用200μl TE緩沖液重懸線粒體沉淀，加入10μl RNase A。加入200μl線粒體裂解液，輕輕混勻（不可吹打），放置1～2min，再加入150μl蛋白沉淀液，迅速混勻。4℃，16,000×g離心5min。此步驟可進一步去除核DNA。
9．取上清，加入一新的離心管中（如用于酶切分析，可加入此步：選用等體積的酚lǜ仿異戊醇25:24:1抽提一次，再用lǜ仿抽提一次，或者直接用lǜ仿抽提兩次，一般來說，此步可去掉一些微量蛋白及糖類，但會造成線粒體DNA的損失，因而用于PCR時可省，并不影響后續(xù)實驗），加入0.6倍體積的異丙醇（如無異丙醇，可加入2.5倍體積的乙醇沉淀DNA，如離心管太滿可分兩管）及5-10μl核酸核酸助沉劑，混勻，-20℃沉淀半小時左右（此步可?。?，4℃，16,000×g離心10min。
10．棄上清，再加入1ml 70%乙醇清洗，4℃，16,000×g離心5min。重復用70%乙醇洗一次。
11．棄上清，再次離心1min吸棄上清，不要碰到管底，開蓋涼干約5-10min。
12．加入20-30μl TE緩沖液,輕彈管底，37℃水浴5分鐘，線粒體DNA溶解。
13．進行DNA電泳檢測及-20℃保存，進行下步的實驗。

注意事項：
1．為保證獲得完整及盡可能多的線粒體，勻漿條件要示：是全程低溫操作。第二是快速。第三，如有條件可將勻漿后的碎片在顯微鏡下觀察。
2．如進行Western Blot和2D-膠電泳，可直接在第6步的沉淀中加入上樣緩沖液裂解線粒體。
3．線粒體DNA本身含量很低，如果電泳檢測不到，可加大上樣量，用更少量的TE溶解沉淀，或者直接進入PCR檢測。
4．以離心力g計算正確的離心速度，不同的離心機可據(jù)此計算離心速度。

一般低溫度心機都有離心力顯示，如果沒有，可以用以下公式簡單的換算。
  G＝1.11×(10^-5)×R×[rpm]²
G為離心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍數(shù)來表示；[rpm]²即：轉(zhuǎn)速的平方；R為半徑，單位為厘米。

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貨號	名稱	規(guī)格
BTN130989	白細胞裂解液	250mL
BTN90901	菌體內(nèi)毒素清除劑	200mL
BTN80926	柱式真菌DNA大量提取試劑盒(玻璃珠法)	4次
BTN60205	柱式質(zhì)粒DNA提取試劑盒	50次
BTN51203	非酶RNA清除劑1.0	1.5mL
WE0182	水產(chǎn)動物基因組提取試劑盒	50次
ALH174	口腔拭子基因組DNA提取試劑盒	50次

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名稱：柱式動物DNA提取試劑盒
貨號：BTN71206
規(guī)格：50次
本試劑盒是在我司動物DNA提取試劑盒的基礎上改良而得的柱式升級產(chǎn)品，主要用于快速提取新鮮或冷凍的動物組織中的基因組DNA。

產(chǎn)品特點：
1. DNA更加純凈，大多數(shù)DNA樣品的OD260/280值在1.8-1.9之間。
2. DNA產(chǎn)率一般在200μg/g左右(跟組織種類密切相關)。
3.可直接用于PCR、酶切、雜交等后續(xù)反應。
4. 操作更加簡單，離心吸附操作代替離心沉淀，整個過程室溫操作約10分鐘，適合大規(guī)模樣品處理。
5. 安全，本試劑盒對人體，無腐蝕性和刺激性氣味。
6. 高，質(zhì)量和國外同類產(chǎn)品相當，但價格更。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	40ml
溶液B	20ml
溶液C	50ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脫液2.0	10ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸和保存、有效期一年。

使用方法：
注意：溶液A容易產(chǎn)生沉淀，溶液B十分粘稠，用前均需要在65℃水浴中加熱使沉淀溶解或粘稠度降低，用前充分搖勻。

1. 根據(jù)使用材料的不同進行下列操作：
a)對貼壁細胞：吸盡培養(yǎng)液，在每10平方厘米細胞中加入0.8mL預熱的溶液A，用槍充分吹打以確保細胞全部裂解，然后把裂解液轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中。
b)對懸浮細胞：離心收集細胞，吸盡液體，在每1-5×106懸浮細胞中加入0.8mL預熱的溶液A，用槍充分吹打以確保細胞全部裂解。然后把裂解液轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中。如果是fibroblasts或carcinoma細胞，0.8mL溶液A的細胞使用量不要超過1×106個細胞。
c)對新鮮或冷凍的組織：先將剪切成小塊的新鮮組織或冷凍保存的組織放入10mL或15mL塑料離心管中，每50-100mg組織加0.8mL預熱的溶液A，用剪切式勻漿器勻漿30秒左右，然后把裂解液轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中。對肝、脾、胰、腎等細胞分裂十分旺盛的組織(細胞中含大量正在復制的DNA)，建議組織的使用量不要超過50mg。
d)對DNAhold保存組織：先用紙吸去DNAhold液體后再剪切成小塊，其余操作同新鮮或冷凍組織的處理。
2. 加入0.4mL預熱的溶液B到裂解液中。由于溶液B十分粘稠，可將1mL槍頭剪掉一截再用，也可以用稱量方法加0.4 g。加入溶液B后需要顛倒數(shù)次充分混勻。
3. 65℃水浴5-10分鐘。如果室溫放置，DNA產(chǎn)量將降低10-20%。
4. 加入0.2mL自備lǜ仿，振蕩器上充分振蕩混均30秒，此時溶液將呈乳白色。一定要確保離心管底的液體被震蕩起來。
5. 12000～15000g室溫離心2分鐘。上清透明，中間層為白膜(蛋白層)。
6.小心將上清液平均轉(zhuǎn)移到兩個新的離心管中，避免觸及中間的白膜。
7. 每個管中加入1.5倍體積的溶液C，充分顛倒混勻。
8. 分兩次上柱(即先轉(zhuǎn)移一半的混合液到離心吸附柱中，室溫放置2分鐘，12000～15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液，然后再將剩下的混合液到離心吸附柱中，室溫放置2分鐘，12000～15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液)。
9. 加0.7mL通用洗柱液到離心吸附柱中，12000～15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
10. 加0.3mL通用洗柱液到離心吸附柱中，12000～15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
11. 12000～15000g室溫再離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的通用洗柱液會污染DNA。
12.室溫放置半分鐘使殘留乙醇揮發(fā)。
13. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一新的1.5mL塑料離心管中，加入50-100μL DNA洗脫液2.0，室溫放置離心吸附柱1-2分鐘。
14. 12000～15000g室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為DNA樣品，可以立即使用或存放于冰箱待用。

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