酵母基因組DNA提取試劑盒（離心由專(zhuān)業(yè)試劑供應(yīng)商北京百奧萊博提供，用于科學(xué)研究，我公司的酵母基因組DNA提取試劑盒（離心品質(zhì)上佳，經(jīng)過(guò)多年的開(kāi)發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購(gòu)。...

特別提示：包括酵母基因組DNA提取試劑盒（離心吸附柱法)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱(chēng)：酵母基因組DNA提取試劑盒（離心吸附柱法)
英文名稱(chēng)：Extraction kit for genomic DNA from yeast
產(chǎn)品貨號(hào)：WH0020
產(chǎn)品規(guī)格：50次

本試劑盒采用、專(zhuān)一結(jié)合DNA的離心吸附柱和獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng)，提取酵母菌基因組DNA，樣品裂解后，DNA在高鹽條件下與硅膠膜特異結(jié)合，在低鹽、高pH值時(shí)DNA從硅膠膜上洗脫下來(lái)。純化過(guò)的基因組DNA可直接用作PCR模板、酶切、雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
·操作簡(jiǎn)單、快速：1h內(nèi)即可獲得高質(zhì)量的酵母基因組DNA。
·害：無(wú)需使用酚、lǜ仿等有害試劑，操作安全。
·純度高：可直接用于PCR、酶切、雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

試劑盒組成：

組分	50T
緩沖液GA	15ml
緩沖液GB	15ml
緩沖液GD	13 ml
漂洗液PW	15ml
洗脫緩沖液TE	15ml
Proteinase K	1ml
吸附柱CB3	50個(gè)
收集管（2 ml）	50個(gè)

保存條件：室溫（15-25℃）干燥條件下，可保存12個(gè)月，更長(zhǎng)時(shí)間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應(yīng)將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時(shí)間，必要時(shí)可在37℃水浴中預(yù)熱10min，以溶解沉淀。

選配組分：RNase A（100mg/ml）（目錄號(hào):WH0217）。

需要自備的試劑：Lyticase（目錄號(hào)：WH0216）,山梨醇buffer

菌體濃度檢測(cè)：
可采用分光光度計(jì)或平板培養(yǎng)法檢測(cè)菌體量，一般對(duì)于釀酒酵母，OD600值為1.0時(shí)，相當(dāng)于1～2×10⁷cells/ml。

注意事項(xiàng)：（請(qǐng)務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng))
1．樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的DNA片段較小且提取量也下降。
2．若緩沖液GA或GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，并搖勻后使用。
3．所有的離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下進(jìn)行。

使用方法：
使用前請(qǐng)先在緩沖液GD和漂洗液PW中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。

1．取酵母細(xì)胞（zuì多不超過(guò)5×10⁷cells），12000rpm（~13400×g)離心1 min，盡量吸除上清（菌液較多時(shí)可以通過(guò)幾次離心將菌體沉淀收集到一個(gè)離心管中）。
2．酵母細(xì)胞壁的破除：
  酶法：向菌體中加入600μl山梨醇buffer，加入大約50U Lyticase（客戶自備，目錄號(hào)：WH0216），充分混勻。30℃處理30 min。4000rpm（~1500×g)離心10min，棄上清，收集沉淀。
  注意：以上為5×10⁷酵母細(xì)胞的Lyticase用量，根據(jù)酵母的菌株和酵母細(xì)胞數(shù)量的不同，所用Lyticase的濃度和孵育時(shí)間應(yīng)該進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。
3．向沉淀中加入200 μl緩沖液GA重懸沉淀，充分混勻。
  如果需要去除RNA，可加入4 μl RNase A（100mg/ml）溶液（客戶自備，目錄號(hào)：WH0217），振蕩15 sec，室溫放置5 min。
4．加入20 μl Proteinase K溶液，混勻。
5．加入220 μl緩沖液GB，充分顛倒混勻，70℃放置10min，溶液應(yīng)變清亮，簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。
  注意：加入緩沖液GB時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，一般70℃放置時(shí)會(huì)消失，不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮，說(shuō)明細(xì)胞裂解不徹底，可能導(dǎo)致提取DNA量少和提取的DNA不純。
6．加220 μl無(wú)水乙醇，充分顛倒混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。
7．將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個(gè)吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12000rpm（~13400×g )離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。
8．向吸附柱CB3中加入500 μl緩沖液GD（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），12,000rpm（~13400×g )離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。
9．向吸附柱CB3中加入600μl漂洗液PW（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），12000rpm（~13400×g )離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。
10．重復(fù)操作步驟9。
11．將吸附柱CB3放回收集管中，12000rpm（~13400×g)離心2 min，倒掉廢液。將吸附柱CB3置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
  注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實(shí)驗(yàn)。
12．將吸附柱CB3轉(zhuǎn)入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加50-200 μl洗脫緩沖液TE，室溫放置2-5 min，12000rpm（~13400×g )離心2 min，將溶液收集到離心管中。
  注意：為增加基因組DNA的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱中，室溫放置2 min，12000rpm （~13400×g )離心2 min。洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50 μl，體積過(guò)小影響回收效率。洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有很大影響。若用ddH2O做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。

DNA濃度及純度檢測(cè)：
1．得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過(guò)程中的剪切力等因素有關(guān)?；厥盏玫降腄NA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。
2．DNA應(yīng)在OD₂₆₀處有顯著吸收峰，OD₂₆₀值為1相當(dāng)于大約50μg/ml雙鏈DNA、40 μg/ml單鏈DNA。
3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值應(yīng)為1.7-1.9，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，使用ddH2O，比值會(huì)偏低，因?yàn)閜H值和離子存在會(huì)影響光吸收值，但并不表示純度低。

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名稱(chēng)：柱式血液DNA提取試劑盒
貨號(hào)：BTN60306
規(guī)格：50次
本試劑盒是基于離心柱/硅膠膜原理的、專(zhuān)門(mén)用于從新鮮或冷凍的動(dòng)物(包括人和禽類(lèi))抗凝全血中提取基因組DNA的試劑。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. DNA純凈，OD260/280在1.8-2.0之間。不含蛋白質(zhì)和RNA污染，可直接用于PCR、酶切、雜交等。
2.產(chǎn)量高，一般為1-10μg/mL全血(對(duì)哺乳動(dòng)物血液)。
3. 操作簡(jiǎn)單，整個(gè)過(guò)程約20分鐘，全室溫操作，適合大規(guī)模樣品處理。
4. 用量廣泛，每次可以處理少達(dá)20μl(對(duì)禽類(lèi)動(dòng)物血液)，多達(dá)1mL的血液(對(duì)哺乳動(dòng)物血液)。
5. 安全，本試劑盒對(duì)人體，無(wú)腐蝕性和刺激性氣味。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
紅細(xì)胞裂解液(A型)	25ml
溶液A	25ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脫液2.0	10ml
說(shuō)明書(shū)	1份

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸、4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在0.02-1mL新鮮或抗凝血液(冷凍血需先37℃水浴融化)中加入0.5mL紅細(xì)胞裂解液(A型)，吹打混勻。
a)哺乳動(dòng)物，血液使用量以300μl以下為宜，使用量越大產(chǎn)量越高，但產(chǎn)率會(huì)降低。如果血液多于300μl，重復(fù)1-2步兩次可以提高產(chǎn)率。
b)禽類(lèi)動(dòng)物，血液使用量以20μl以下為宜，可以從第3步做起。
2.室溫12000～15000rpm離心5分鐘，沉淀呈粉紅色，小心傾去上清。
3. 再短暫離心半分鐘，吸棄殘留的液體。此步有利于后面的細(xì)胞裂解，但一般可以省略。
4. 向有沉淀的離心管內(nèi)加入0.5mL溶液A(溶液A有少量晶體沉淀，用前需要搖晃均勻)，用移液槍吹打使沉淀充分懸浮起來(lái)。此步目的是裂解細(xì)胞，釋放DNA，所以吹打越充分越好。
5. 靜置2分鐘待溶液變清亮后，將液體轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中并靜置2-5分鐘，以使DNA與膜充分結(jié)合。
6. 12000rpm離心半分鐘，DNA將吸附到膜上，棄收集管中的廢液。
7. 加入0.7mL的通用洗柱液，12000rpm離心半分鐘，棄收集管中的廢液。
8. 加入0.3mL的通用洗柱液，12000rpm離心半分鐘，棄收集管中的廢液。
9. 12000rpm離心半分鐘，甩干殘留液體。此步很重要，以去除膜上殘留通用洗柱液，否則會(huì)影響后續(xù)反應(yīng)。
10. 將離心吸附柱置于一新的1.5mL塑料離心管(自備)中，加入適量50μl DNA洗脫液2.0，室溫放置2分鐘。如果將DNA洗脫液2.0在65℃預(yù)熱后再使用，洗脫DNA的效果會(huì)更好。
11. 12000rpm離心半分鐘，離心管底溶液即DNA溶液?？梢粤⒓词褂没蚍疟溟L(zhǎng)期保存。

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