固定組織基因組DNA提取試劑盒由專業(yè)試劑供應(yīng)商北京百奧萊博提供，用于科研試驗，我公司專注于DNA提取純化產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的固定組織基因組DNA提取試劑盒質(zhì)量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。...

特別提示：包括固定組織基因組DNA提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：固定組織基因組DNA提取試劑盒
英文名稱：FFPE DNA Extraction Kit
產(chǎn)品貨號：WE0171
產(chǎn)品規(guī)格：50次

  本試劑盒適用于從福爾馬林固定、石蠟包埋的組織中有效純化總DNA，包括基因組DNA和線粒體DNA。本品使用專門優(yōu)化的裂解液和蛋白酶K，釋放福爾馬林固定或組織切片樣本中的DNA，無需過夜操作；消化后的樣品在較高的溫度孵育后，去除由福爾馬林交聯(lián)造成的抑制作用，有效提高DNA的產(chǎn)量和純度；優(yōu)化的緩沖系統(tǒng)使裂解液中的DNA可特異結(jié)合到硅膠吸附膜上，而其他污染物可流過膜；PCR和酶反應(yīng)的抑制劑以及殘留的雜質(zhì)可通過兩步漂洗步驟有效去除，zuì后使用低鹽緩沖液或水洗脫，即可獲得高純度DNA。經(jīng)過純化的DNA可以直接用于PCR、Real-time PCR、SNP基因分型、STR基因分型和藥物基因組學(xué)研究等。

試劑盒組成：

組份	50次
Buffer GTL	15ml
Buffer GL	15ml
Buffer GW1(濃縮液)	13ml
Buffer GW2(濃縮液)	15ml
Buffer GE	15ml
蛋白酶K	25mg
蛋白酶K 儲存液	1.25ml
吸附柱DS及收集管	50套

自備試劑：無水乙醇、10mM PBS(PH7.4)(固定液中的組織)。

實驗前準(zhǔn)備及重要注意事項：
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 儲存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿長時間室溫放置，避免反復(fù)凍融，以免影響其活性。
2、獲得樣品后，要盡快將樣品在4%-10%的福爾馬林中固定，固定時間以14-24小時為宜，時間過長易導(dǎo)致基因組斷裂，影響下游實驗。
3、確保包埋前的樣品徹底脫水，殘留的福爾馬林會抑制蛋白酶K 的作用。
4、次使用前應(yīng)按試劑瓶標(biāo)簽說明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入無水乙醇。
5、使用前請檢查Buffer GTL和Buffer GL是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀，如有結(jié)晶或者沉淀，請將Buffer GL和Buffer GTL于56℃水浴重新溶解。
6、如果下游實驗對RNA污染比較敏感，可以在加入Buffer GL前加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本試劑盒并未提供，如果需要可單獨向本公司訂購，貨號：WE0225S。

操作步驟：
1、樣本處理：
a. 石蠟包埋樣本：用手術(shù)刀將組織塊中多余的石蠟修剪掉，露出組織。
b. 福爾馬林等固定液中的樣本：取約20 mg的樣本，切成小塊，置于離心管中，加入500μl 10mM PBS(PH7.4),渦旋振蕩，12000rpm(～～13400×g)離心1分鐘，重復(fù)3次，可直接進(jìn)行第7步操作。
2、將組織塊切成5-10μM的薄片。
注意：如果樣品表面已經(jīng)暴露在空氣中，請將接觸空氣的2-3片棄掉不用。
3、取約1×1cm2的切片(共約4-5片切片)置于離心管(自備)中，加入1ml二甲苯，蓋緊管蓋，渦旋震蕩10秒。
4、12000rpm離心2分鐘，小心吸棄上清，注意不要吸棄沉淀。
5、加入1ml無水乙醇，渦旋震蕩混勻。12000rpm離心2分鐘，棄上清，注意不要吸棄沉淀。
注意：乙醇可以除去樣品中殘余的二甲苯。
6、打開管蓋，室溫或zuì高至37℃孵育10分鐘，直至無乙醇?xì)埩簟?br /> 7、加入180μl Buffer GTL，重懸沉淀；加入20μl 蛋白酶K ，渦旋震蕩混勻。
8、56℃孵育1小時，直至樣品完全溶解。90℃孵育1小時。短暫離心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)此步驟的目的是修復(fù)由甲醛變性的核酸，孵育的溫度過高或時間過長可能造成DNA斷裂，產(chǎn)生DNA碎片。
2)56℃孵育后的樣品可置于室溫，直至水浴鍋或干浴鍋溫度達(dá)到90℃后再把樣品置于90℃孵育。
3)如需除去RNA，可將樣品溫度降到室溫后，加入4μl濃度為100 mg/ml 的RNase A溶液(貨號：WE0225S)，震蕩混勻，室溫放置5-10分鐘。
9、加入200μl Buffer GL，渦旋震蕩徹底混勻。加入200μl無水乙醇，渦旋震蕩徹底混勻。短暫離心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)加入Buffer GL和無水乙醇后要立即充分混勻。
2)如果需要對多個樣品進(jìn)行操作，可以將Buffer GL和無水乙醇事先混勻后加樣。
10、將步驟9所得溶液全部加入已裝入收集管的吸附柱中，若一次不能加完溶液，可分多次轉(zhuǎn)入。12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
11、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
12、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
13、12000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中廢液。將吸附柱置于室溫數(shù)分鐘以徹底晾干。
注意：這一步目的是將吸附柱中殘余乙醇去除，乙醇?xì)埩魰绊懞罄m(xù)酶促反應(yīng)(酶切、PCR等)。
14、將吸附柱置于一個新的離心管(自備)中，向吸附柱的中間部位懸空加入20-100μl Buffer GE或滅菌水，室溫放置2-5分鐘，12000rpm離心1分鐘，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游實驗對pH值或EDTA敏感，可以用滅菌水洗脫。洗脫液的pH值對洗脫效率有很大影響，若用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍)，pH值低于7.0時洗脫效率不高。
2)離心之前室溫孵育5分鐘可以增加產(chǎn)量。
3)用另外的20-100μl Buffer GE或滅菌水再次洗脫可以增加產(chǎn)量。
4)如果要提高DNA的終濃度，可以將步驟14所得的DNA洗脫液重新加至吸附膜上，重復(fù)步驟14；若洗脫體積小于100μl，可以增加DNA的終濃度，但可能會減少總產(chǎn)量。如果DNA的量小于1μg，推薦用20μl Buffer GE或滅菌水洗脫。
5)因為保存在水中的DNA會受到酸性水解作用的影響，如需長期保存，推薦用Buffer GE洗脫并于-20℃保存。

儲存條件：室溫(15～30℃)。

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名稱：高純質(zhì)粒小提試劑盒
貨號：WE0162
規(guī)格：50次|200次
  本試劑盒提供一種簡單、快捷、的提取質(zhì)粒的方法，在堿裂解法裂解細(xì)胞的基礎(chǔ)上，采用獨特的硅基質(zhì)膜吸附技術(shù)和試劑配方，通過離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下專一的結(jié)合溶液中的質(zhì)粒DNA，經(jīng)過兩步洗滌，一步洗脫，zuì大限度的去除蛋白質(zhì)、基因組、RNA和其他雜質(zhì)。得到的質(zhì)粒DNA可直接用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染、PCR、酶切、測序、連接等生物學(xué)實驗。

試劑盒組成：

組份	50次	200次
Buffer P1	15ml	60ml
Buffer P2	15ml	60ml
Buffer N3	20ml	80ml
Buffer PB	10ml	35ml
Buffer PW(濃縮液)	6ml	25ml
Buffer EB	10ml	30ml
RNase A(10mg/ml)	150μl	600μl
吸附柱DM及收集管	50套	200套

自備試劑：無水乙醇。

實驗前準(zhǔn)備及重要注意事項：
1、所有組分可在干燥、室溫(15～30℃)環(huán)境穩(wěn)定保存1年，將吸附柱置于2～8℃可保存更長時間，加入RNase A的Buffer P1 置于2～8℃可穩(wěn)定保存6個月。
2、次使用前，將RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混勻，置于2–8℃保存，使用前需在室溫中放置一段時間，恢復(fù)至室溫后使用。
3、次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明在Buffer PW中加入無水乙醇。
4、使用前若發(fā)現(xiàn)Buffer P2、Buffer N3、Buffer PB有沉淀，可在37℃水浴幾分鐘，即可恢復(fù)澄清(請勿劇烈晃動Buffer P2)。
5、注意不要直接接觸Buffer P2 、Buffer N3和 Buffer PB，使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子。
6、提取質(zhì)粒的量和純度與細(xì)菌培養(yǎng)濃度、菌株種類、質(zhì)粒大小、質(zhì)?？截悢?shù)等因素有關(guān)。

操作步驟：
1、取1-5ml過夜培養(yǎng)的菌液加入離心管(自備)中，13000rpm(~～16200×g)離心30秒收集菌體沉淀，盡量吸棄上清。
2、向留有菌體沉淀的離心管中加入250μl Buffer P1(請先檢查是否已加入RNase A)，使用移液器或渦旋振蕩器充分混勻，懸浮菌體沉淀。
注意：如果菌塊未徹底混勻，將會影響裂解效果，導(dǎo)致提取量和純度偏低。
3、向離心管中加入250μl Buffer P2，溫和地上下顛倒混勻4-6次，充分混勻使菌體裂解，此時溶液應(yīng)變得清亮粘稠。
注意：溫和混勻，不要劇烈震蕩，以免打斷基因組DNA，造成提取的質(zhì)粒中混有基因組DNA片段。此步驟所用時間應(yīng)不超過5分鐘，避免質(zhì)粒受到破壞。
4、向離心管中加入350μl Buffer N3，立即溫和地上下顛倒混勻8-10次，充分混勻，此時應(yīng)出現(xiàn)白色絮狀沉淀。13000rpm離心5分鐘。
注意：Buffer N3加入后應(yīng)立即混勻，避免產(chǎn)生局部沉淀。
5、將步驟4中所得的上清液轉(zhuǎn)移到已裝入收集管的吸附柱DM中，13000rpm離心30秒鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
6、向吸附柱中加入150μl Buffer PB，13000rpm離心30秒。
7、向吸附柱中加入400μl Buffer PW(請先檢查是否已加入無水乙醇)，13000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液。
8、將吸附柱置于一個新的離心管(自備)中，向吸附膜的中間部位加入50-100μl Buffer EB，室溫放置2分鐘，13000rpm離心1分鐘，將質(zhì)粒溶液收集到離心管中。-20℃保存質(zhì)粒。
注意：
1)為了增加質(zhì)粒的回收效率，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，室溫放置2分鐘，13000rpm離心1分鐘，將質(zhì)粒溶液收集到離心管中。
2)質(zhì)粒拷貝數(shù)較低或>10 kb時， Buffer EB在65-70℃水浴預(yù)熱，可以增加提取效率。

儲存條件：室溫(15～30℃)。


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