SYA575 小反芻獸疫病毒

產品簡介
小反芻獸疫病毒由專業(yè)試劑供應商北京百奧萊博提供,用于科研目的,本品質量穩(wěn)定,價位合理,需要小反芻獸疫病毒等動物疫病PCR檢測試劑盒產品的客戶,請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...
產品詳細介紹
特別提示:包括小反芻獸疫病毒(PPRV)單重凝膠PCR檢測試劑盒在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產品名稱:小反芻獸疫病毒(PPRV)單重凝膠PCR檢測試劑盒
產品貨號:SYA575
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名稱:禽流感病毒(AIV-M)通用型單重熒光PCR檢測試劑盒(定性/定量)
貨號:SYA320
規(guī)格:48次/盒|96次/盒
一、簡介:
禽流感病毒實時熒光qRT-PCR檢測試劑是按照美國農業(yè)部(USDA)的檢測標準和我國《禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測方法》(GB/T 19438.1-2004)而制備的商業(yè)化檢測試劑盒。本試劑盒為中的探針報告基團為6-FAM,淬滅基團為MGB。本方法可定性檢測所有亞型禽流感病毒。
二、用途:
本試劑盒適用于檢測各種禽類喉咽棉拭子、泄殖腔棉拭子、各種組織樣品、尿囊液及細胞培養(yǎng)液等??捎糜谇萘鞲胁《靖腥镜妮o助診斷、監(jiān)測及流行病學調查,其檢測結果僅供參考。
三、試劑盒組成:(48T)
組份 數(shù)量 規(guī)格
熒光qRT-PCR反應液(AIV-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
無核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
陰性對照(NTC) 1 管 50μL/管
陽性對照(AIV-PTC) 1 管 50μL/管
四、儲存條件及有效期:
本試劑盒于-18℃以下保存,有效期為6個月。
五、熒光PCR儀器適用范圍:
ABI系列,Roche系列等熒光定量PCR檢測儀等。
六、樣品的采集與RNA提取
6.1 樣品的采集
按照標準《高致病性禽流感診斷技術》(GB/T 18936-2003 )和《禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測方法》(GB/T 19438.1-2004 )進行樣品的采集。
6.2 樣品RNA提取
可按常規(guī)方法提取,也可采用商品化試劑盒提取病毒RNA。
(1) 取滅菌的1.5 mL Eppendorf離心管,做好標識。
(2) 每管加入600 μL裂解液,分別加入被檢樣本200 μL,再加入200 μLlǜ仿,混勻器上振蕩混勻5 s,于4℃ 12000 r 離心15 min。
(3) 取無RNA酶的1.5 mL Eppendorf離心管,加入-20℃預冷400μL異丙醇,吸取步驟(2)各管中的上清液轉移至相應的管中,避免吸出中間層,顛倒混勻。
(4) 于4℃ 12000 r離心15 min,棄上清,倒置于吸水紙上,沾干液體;加入600μL 75%預冷乙醇,洗滌。
(5) 于4℃ 12000 r離心10 min,棄上清,倒置于吸水紙上,沾干液體。
(6) 10000 r離心10 s,用微量加樣器將其吸干,室溫干燥5 min~10 min。
(7) 加入10μL 無核酸降解酶的水,溶解管底的RNA,5000 r離心5 s,冰上保存?zhèn)溆?。若需長期保存須放置-70℃ 冰箱。
注:陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取),直接取5μL加入到反應體系中即可。由于陽性對照濃度較高,建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。
七、檢測步驟:
7.1 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光qRT-PCR反應液(AIV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000r離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(AIV-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 real time RT-PCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
反轉錄(Reverse Trans
預變性 1循環(huán) 94℃ for 30 sec
PCR擴增(PCR amplification ) 40循環(huán) 94℃ for 5 sec
60℃ for 30 sec
在60℃延伸時收集熒光信號 。報告基團:設置為FAM。
八、結果分析:
8.1 結果分析條件設定
直接讀取檢測結果。基線和閾值設定原則根據(jù)儀器噪聲情況進行調整,以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴增曲線的zuì高點為準。
8.2 試驗成立判定
(1) 陰性對照(NTC):不應產生任何的擴增曲線。
(2) 陽性對照(AIV -PTC):均產生擴增曲線。
(3) 以上條件應同時滿足 ,否則,此次試驗視為無效。
8.3 結果判定
(1) 在試驗成立的條件下,Ct值≤35的樣本為陽性,表明AIV核酸陽性。
(2) Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本,表明AIV核酸陰性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判為可疑樣品。對于可疑樣品,先看擴增曲線。如果擴增曲線為對數(shù)擴增曲線,則為可疑陽性,否則判為陰性。
(4) 對于可疑陽性樣品,重新抽提核酸,再次進行AIV qRT-PCR檢測。如果重復擴增曲線為對數(shù)擴增曲線,判為樣本陽性,表明AIV核酸陽性;否則判為樣本陰性。
九、注意事項:
(1) 初次使用前請仔細閱讀說明書。并嚴格按照說明書步驟操作。
(2) 所有使用的離心管zuì好高壓滅菌,而且必須不含RNA酶。
(3) PCR操作應嚴格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標本處理區(qū)、PCR擴增區(qū)等),防止實驗室污染。
(4) 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺進行,以免污染。
(5) 試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。

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