固定組織基因組DNA提取試劑由專(zhuān)業(yè)試劑供應(yīng)商北京百奧萊博提供，用于科研目的，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價(jià)位合理，需要固定組織基因組DNA提取試劑等DNA提取純化產(chǎn)品的客戶(hù)，請(qǐng)到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括固定組織基因組DNA提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱(chēng)：固定組織基因組DNA提取試劑盒
英文名稱(chēng)：NewPurify FFPE DNA Extraction kit
產(chǎn)品貨號(hào)：WE0172
產(chǎn)品規(guī)格：50次

  本試劑盒適用于從福爾馬林固定、石蠟包埋組織中有效純化基因組DNA。本品使用專(zhuān)門(mén)優(yōu)化脫蠟劑和裂解液，釋放福爾馬林固定或組織切片樣本中的DNA，不涉及有機(jī)試劑二甲苯，無(wú)需過(guò)夜操作；消化后的樣品在較高的溫度孵育后，去除游離DNA的福爾馬林交聯(lián)，有效提高DNA的產(chǎn)量和純度；優(yōu)化的緩沖系統(tǒng)使裂解液中的DNA可特異結(jié)合到吸附膜上，抑制劑通過(guò)兩步漂洗步驟有效去除，zuì后使用低鹽緩沖液或水洗脫，即可獲得高純度DNA。同時(shí)配置微量吸附柱，洗脫體積可低至20μl。經(jīng)過(guò)純化的DNA可以直接用于PCR、Real-time PCR、SNP基因分型、STR基因分型、二代測(cè)序和藥物基因組學(xué)研究等。
  從福爾馬林固定、石蠟包埋樣本中分離的DNA分子量通常低于新鮮或冷凍樣本中的DNA。DNA片段化的程度取決于樣本類(lèi)型、儲(chǔ)存時(shí)間以及固定的條件。

試劑盒組成：

組份	50次
Buffer GTL	15ml
Buffer GL	15ml
Buffer GW1(濃縮)	13ml
Buffer GW2(濃縮)	15ml
Buffer EB	10ml
Buffer DS	10ml
蛋白酶K	25 mg
蛋白酶K 儲(chǔ)存液	1.25ml
離心吸附柱DF及收集管	50套
離心管(L-1.5ml)	50個(gè)

自備試劑：無(wú)水乙醇。

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備及重要注意事項(xiàng)：
1、獲得樣品后，要盡快將樣品在4%-10%的福爾馬林中固定，固定時(shí)間以14-24小時(shí)為宜，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)易導(dǎo)致基因組斷裂，影響下游實(shí)驗(yàn)。如果甲醛固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或樣本存放時(shí)間過(guò)久(＞1年)則易導(dǎo)致DNA完整性受損，無(wú)法擴(kuò)出長(zhǎng)片段。
2、確保包埋前的樣品徹底脫水，殘留的福爾馬林會(huì)抑制蛋白酶K 的作用。
3、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 儲(chǔ)存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿長(zhǎng)時(shí)間室溫放置，以免影響其活性。
4、次使用前應(yīng)按試劑瓶標(biāo)簽說(shuō)明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入無(wú)水乙醇。
5、使用前請(qǐng)檢查Buffer GTL、Buffer GL和Buffer DS是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀，如有結(jié)晶或者沉淀，請(qǐng)將Buffer GTL、Buffer GL和Buffer DS于56℃水浴重新溶解。
6、如果下游實(shí)驗(yàn)對(duì)RNA污染比較敏感，可以在加入Buffer GL前加入2μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本試劑盒并未提供，如果需要可單獨(dú)向本公司訂購(gòu)，貨號(hào)：WE0225S。
7、實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將水浴鍋或恒溫混勻儀預(yù)熱至56℃。

操作步驟：

石蠟包埋樣本
1、用手術(shù)刀將組織塊中多余的石蠟修剪掉，露出組織后切成5-10μM的薄片。
2、取約1×1cm2的切片(共約3-8片切片)置于離心管(自備)中，加入160μl Buffer DS，渦旋震蕩10秒。短暫離心將樣本收集到管底。56℃孵育3分鐘，水浴鍋中取出后靜置，降至室溫后進(jìn)行下一步操作。
注意：如果樣品表面暴露在空氣中，zuì初的2-3片棄掉不用。
3、上述管中加入180μl Buffer GTL，渦旋震蕩混勻，12000rpm離心1分鐘，溶液分為兩層。取20μl 蛋白酶K 加入到下層溶液中，移液器小心吹吸混勻。
4、56℃孵育1小時(shí)，直至樣品完全溶解。90℃孵育1小時(shí)。12000rpm離心1分鐘，使用200μl槍頭沿管壁小心吸取下層的水相于新的離心管中。
注意：
1)此步驟的目的是修復(fù)由甲醛變性的核酸，孵育的溫度過(guò)高或時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能造成DNA斷裂，產(chǎn)生DNA碎片。
2)56℃孵育后的樣品可置于室溫，直至水浴鍋或干浴鍋溫度達(dá)到90℃后再把樣品置于90℃孵育。
3)如需除去RNA，可將樣品溫度降到室溫后，加入2μl濃度為100 mg/ml 的RNase A溶液(貨號(hào)：WE0225S)，震蕩混勻，室溫放置2分鐘。

福爾馬林等固定液中的樣本
1、取約20 mg的樣本，切成小塊，置于離心管中，加入500μl 10mM PBS(PH7.4)，渦旋振蕩，12000rpm(～～13400×g)離心1分鐘，棄上清，重復(fù)3次。
2、上述管中加入180μl Buffer GTL，20μl 蛋白酶K ，渦旋震蕩混勻。
3、56℃孵育1小時(shí)，直至樣品完全溶解。90℃孵育1小時(shí)。短暫離心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)此步驟的目的是修復(fù)由甲醛變性的核酸，孵育的溫度過(guò)高或時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能造成DNA斷裂，產(chǎn)生DNA碎片。
2)56℃孵育后的樣品可置于室溫，直至水浴鍋或干浴鍋溫度達(dá)到90℃后再把樣品置于90℃孵育。
4、12000rpm離心1分鐘，使用200μl槍頭沿管壁小心吸取上清到新的離心管中。
注意：如需除去RNA，可將樣品溫度降到室溫后，加入2μl濃度為100 mg/ml 的RNase A溶液(貨號(hào)：WE0225S)，震蕩混勻，室溫放置2分鐘。
5、加入200μl Buffer GL，渦旋震蕩混勻后加入200μl無(wú)水乙醇，渦旋震蕩徹底混勻。短暫離心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)加入Buffer GL和無(wú)水乙醇后要立即充分混勻。
2)加入Buffer GL和無(wú)水乙醇后可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
3)如果需要對(duì)多個(gè)樣品進(jìn)行操作，可以將Buffer GL和無(wú)水乙醇事先混勻后加樣。
6、將步驟5所得溶液全部加入已裝入收集管的吸附柱DF中，若一次不能加完溶液，可分多次轉(zhuǎn)入。12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需進(jìn)一步提高DNA純度，可重復(fù)步驟8。
9、12000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中廢液。將吸附柱置于室溫?cái)?shù)分鐘以徹底晾干。
注意：這一步目的是將吸附柱中殘余乙醇去除，乙醇?xì)埩魰?huì)影響后續(xù)酶促反應(yīng)。
10、將吸附柱置于一個(gè)新的1.5ml收集管中，向吸附柱的中間部位懸空加入20-100μlBuffer EB或滅菌水，室溫放置2-5分鐘，12000rpm離心1分鐘，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率有很大影響，若用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5，pH值低于7.0時(shí)洗脫效率不高。
2)如果要提高DNA的終濃度，可以將步驟10所得的DNA洗脫液重新加至吸附膜上，室溫放置2分鐘，12000rpm離心1分鐘。

儲(chǔ)存條件：室溫(15～30℃)。

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名稱(chēng)：痰液采集器
貨號(hào)：BTN130938
規(guī)格：1個(gè)

名稱(chēng)：血液游離DNA提取試劑盒(液體樣品DNA提取試劑盒)
貨號(hào)：BTN121001
規(guī)格：50次
本試劑盒是專(zhuān)門(mén)用于從各種微量和痕量樣品中提取DNA和RNA的試劑盒。

試劑盒特點(diǎn)：
1. 核酸的回收率高，可以達(dá)到90%以上，可以跟QIAGEN的同類(lèi)產(chǎn)品媲美。
2.一管式操作，減少了樣品污染的可能。
3.一站式套裝，除樣品外客戶(hù)不需要準(zhǔn)備任何試劑，降低了實(shí)驗(yàn)誤差。
4. 安全，不需要使用苯酚和lǜ仿等有機(jī)溶液。
5.可以處理各種形態(tài)的樣品，包括液體樣品，單個(gè)或少量的細(xì)胞，微小胚胎等等。
6.與PCR、熒光PCR、RT-PCR、熒光RT-PCR等后續(xù)反應(yīng)兼容。
7. 試劑穩(wěn)定，可以長(zhǎng)期放置。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	15ml
溶液B	25ml
溶液C	55ml
溶液D	5ml
說(shuō)明書(shū)	1份

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸，溶液A和溶液D需要4℃保存，溶液B和溶液C室溫保存，有效期一年。溶液B和溶液C具有揮發(fā)性，使用后需要將瓶蓋擰緊。

使用方法：
1. 將不超過(guò)0.1mL的樣品轉(zhuǎn)移到自備的1.5mL旋蓋塑料離心管中。
2. 加入0.3mL溶液A，蓋上蓋子后振蕩3-5秒。注意:溶液A用前需37℃-65℃水浴融化并充分搖勻后方可使用。
3.室溫靜置10分鐘。
4. 加入0.4mL溶液B，蓋上蓋子后振蕩3-5秒。
5. 15000g室溫離心15分鐘。強(qiáng)烈建議在離心管管壁上用記號(hào)筆做簡(jiǎn)單標(biāo)記以區(qū)別離心面和向心面。
6.小心移棄上清。注意不要觸及離心面管底的核酸沉淀。
7. 加入1.0mL溶液C，振蕩數(shù)秒后15000g室溫離心5分鐘。注意：將離心管放入離心機(jī)時(shí)一定要將離心面向外。
8.小心移棄上清。注意不要觸及離心面管底的核酸沉淀。
9. 短暫離心數(shù)秒。注意：將離心管放入離心機(jī)時(shí)一定要離心面向外。
10.小心移棄殘留上清(殘留的溶液C會(huì)影響后續(xù)反應(yīng))。此時(shí)管壁(離心面方向)上將有可見(jiàn)的膜狀沉淀。
11. 加入100μl溶液D，用移液槍仔細(xì)吹打離心管管底和管壁的膜狀沉淀，使其溶解。溶解液如果混濁或有少量不溶物是正?，F(xiàn)象，不溶沉淀物中就裹含有核酸。
12. 直接取適量樣品用于PCR或RT-PCR，也可短期保存于-20℃或-80℃。

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