細菌基因組DNA提取試劑盒是高品質(zhì)的DNA提取純化產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于科研試驗，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多細菌基因組DNA提取試劑盒等DNA提取純化產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括細菌基因組DNA提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：細菌基因組DNA提取試劑盒
英文名稱：Extraction kit for genomic DNA from bacteria
產(chǎn)品貨號：WH0028
產(chǎn)品規(guī)格：50次

本試劑盒采用可以、專一結(jié)合DNA的離心吸附柱和獨特的緩沖液系統(tǒng)，既適用于革蘭氏陰性菌基因組DNA的提取，也可適用于革蘭氏陽性菌基因組DNA的提取。本試劑盒也可用于食品致病菌（微生物)基因組提取，如：金黃色葡萄球菌、霍亂弧菌、出血性大腸桿菌O157：H7、單增李斯特、沙門氏菌、阪崎腸肝菌等?？蓮?-5ml細菌培養(yǎng)液中，快速提取純化10-40μg純凈的基因組DNA，所得基因組DNA可直接用作PCR模板、酶切、雜交等分子生物學(xué)實驗。

產(chǎn)品特點：
·簡單快速：革蘭氏陰性菌在1h內(nèi)可獲得高純的基因組DNA。
·質(zhì)量好：DNA可直接用于PCR、酶切、雜交等分子生物學(xué)實驗。

細菌類型	革蘭氏陰性	革蘭氏陽性
細菌濃度	2×108cells/ml	3.5×108cells/ml
培養(yǎng)液體積	1ml	1ml
DNA得量	15～20μg	6～13μg
OD260/OD280	1.7～1.9	1.7～1.9

注：細菌種類、培養(yǎng)時間不同提取的DNA量會有差異；革蘭氏陽性菌需要使用溶菌酶進溶菌等特殊處理后，再按革蘭氏陰性菌的操作步驟進行基因組DNA的提取。

試劑盒組成：

組分	50T
緩沖液GA	15ml
緩沖液GB	15ml
緩沖液GD	13ml
漂洗液PW	15ml
洗脫緩沖液TE	15ml
Proteinase K	1ml
吸附柱CB3	50個
收集管（2ml）	50個

保存條件：室溫（15-25℃）干燥條件下，可保存12個月，更長時間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應(yīng)將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時間，必要時可在37℃水浴中預(yù)熱10min，以溶解沉淀。

自備試劑：溶菌酶（革蘭氏陽性菌)、無水乙醇、溶菌酶緩沖液（20mM Tris,pH8.0;2mM Na2-EDTA;1.2%Triton-100 )

注意事項：（請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項)
1．樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會導(dǎo)致提取的DNA片段較小且提取量也下降。
2．若緩沖液GA或GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，并搖勻后使用。
3．所有的離心步驟均為使用臺式離心機，室溫下離心。

使用方法：
使用前請先在緩沖液GD和漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標(biāo)簽。

1．取細菌培養(yǎng)液1-5ml，10000rpm（~11500×g)離心1 min，盡量吸凈上清。
2．向菌體沉淀中加入200μl緩沖液GA，振蕩至菌體徹底懸浮。
  注意：對于較難破壁的革蘭氏陽性菌，可略過第2步驟，加入溶菌酶進行破壁處理，具體方法為：加入180 μl緩沖液（20mM Tris,pH 8.0；2 mM Na2-EDTA；1.2% Triton；終濃度為20mg/ml的溶菌酶（溶菌酶必須用溶菌酶干粉溶解在緩沖液中進行配制，否則會導(dǎo)致溶菌酶無活性))，37℃處理30 min以上。
  如果需要去除RNA，可加入4 μl RNase A（100 mg/ml）溶液（客戶自備，目錄號：WH0217），振蕩15 sec，室溫放置5 min。
3．向管中加入20 μl Proteinase K溶液，混勻。
4．加入220 μl緩沖液GB，振蕩15 sec，70 ℃放置10min，溶液應(yīng)變清亮，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。
  注意：加入緩沖液GB時可能會產(chǎn)生白色沉淀，一般70℃放置時會消失，不會影響后續(xù)實驗。如溶液未變清亮，說明細胞裂解不徹底，可能導(dǎo)致提取DNA量少和提取出的DNA不純。
5．加220 μl無水乙醇，充分振蕩混勻15 sec，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。
6．將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12000rpm （~13400×g )離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。
7．向吸附柱CB3中加入500 μl緩沖液GD（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12000rpm（~13400×g )離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。
8．向吸附柱CB3中加入600 μl漂洗液PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12000rpm（~13400×g )離心30 sec，倒掉廢液，吸附柱CB3放入收集管中。
9．重復(fù)操作步驟8。
10．將吸附柱CB3放回收集管中，12000rpm（~13400×g)離心2 min，倒掉廢液。將吸附柱CB3置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
  注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實驗。
11．將吸附柱CB3轉(zhuǎn)入一個干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加50-200μl洗脫緩沖液TE，室溫放置2-5 min，12000rpm （~13400×g )離心2 min，將溶液收集到離心管中。
  注意：洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50 μl，體積過小影響回收效率。洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用ddH2O做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。為增加基因組DNA的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室溫放置2 min，12,000rpm（~13400×g )離心2 min。

DNA濃度及純度檢測：
1．得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。回收得到的DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。
2．DNA應(yīng)在OD₂₆₀處有顯著吸收峰，OD₂₆₀值為1相當(dāng)于大約50 μg/ml雙鏈DNA、40μg/ml單鏈DNA。
3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值應(yīng)為1.7-1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用ddH2O，比值會偏低，因為pH值和離子存在會影響光吸收值，但并不表示純度低。

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貨號：YT013
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本試劑盒是非常的基因組DNA抽提試劑盒?？梢猿樘釀游锝M織、鼠尾、培養(yǎng)細胞、細菌、酵母、動物血液、昆蟲以及固定組織的包括基因組DNA在內(nèi)的總DNA。一個試劑盒通過說明書中提供的不同操作方法，可以抽提除植物樣品外的幾乎所有樣品中的總DNA。

樣品先被蛋白酶K消化，隨后加入適合DNA結(jié)合到純化柱上的緩沖液，然后加入到純化柱內(nèi)。通過高速離心，使DNA在穿過純化柱的瞬間，結(jié)合到純化柱上，隨后通過兩次洗滌去除各種雜質(zhì)，zuì后通過洗脫液把DNA洗脫下來。整個過程無需酚lǜ仿抽提，無需酒精沉淀，樣品裂解后僅需約15分鐘即可完成。

通過本試劑盒純化得到的基因組DNA的長度zuì長可達50kb左右，平均為30kb左右，zuì短為100bp的DNA也可以被純化。如需獲得更長的基因組DNA，對于哺乳動物樣品，包括組織或細胞等，可以使用百奧萊博的(YT012)哺乳動物基因組DNA抽提試劑盒。通過本試劑盒獲得的總DNA，OD260/OD280的范圍通常在1.7至1.9之間。

本試劑盒可以抽提少至數(shù)百個細胞，多至25mg組織、0.5-1cm鼠尾、500萬個培養(yǎng)細胞、20億個細菌或5000萬個酵母。樣品用量過多，反而會影響抽提效果。如果待抽提樣品的DNA含量小于5ng，建議加入適當(dāng)量的carrier DNA，例如poly-dT或其它對后續(xù)實驗沒有干擾的DNA，也可以加入適當(dāng)量的carrier RNA，例如yeast RNA等，以改善抽提效果。

本試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)操作步驟抽提得到的總DNA會含有少量RNA，但如果按照可選步驟加入RNase A，就可以獲得不含RNA的高純度總DNA。含有RNA的總DNA可以用于PCR，但對于某些其它的后續(xù)反應(yīng)可能會產(chǎn)生一些影響。

純化柱對于DNA的zuì大容量約為30微克。通常每200萬Hela細胞或500萬淋巴細胞可以抽提得到15-25微克總DNA，每25mg肝、腦、腎組織可以抽提得到10-30微克總DNA，每25毫克心、肺組織可以抽提得到5-10微克總DNA，每10mg脾組織可以抽提得到5-30微克總DNA，每1.2cm小鼠尾尖或0.3cm大鼠尾尖可以獲得10-25微克總DNA。本試劑盒可以抽提50個樣品的總DNA。

產(chǎn)品組份：
樣品裂解液A——————10ml
樣品裂解液B——————11ml
洗滌液I————————21ml (次使用前加入7ml無水乙醇)
洗滌液II———————16ml (次使用前加入24ml無水乙醇)
洗脫液————————22ml
蛋白酶K————————1.1ml
DNA純化柱及廢液收集管————50套

儲存條件：室溫，有效期一年。(蛋白酶K需-20℃保存)

注意事項：
1.抽提細菌、酵母樣品時還需要一些特定的試劑，詳情請參考相關(guān)實驗步驟。
2.如需制備不含RNA的高純度總DNA，需自備RNase A。
3.溫度較低時樣品裂解液A或樣品裂解液B中可能會有沉淀產(chǎn)生，屬正常現(xiàn)象。使用前必須檢查一遍。如有沉淀，55℃水浴孵育使沉淀溶解，混勻后使用。
4.次使用前洗滌液I需添加7ml無水乙醇，洗滌液II需添加24ml無水乙醇，混勻，并在瓶上做好標(biāo)記。
5.本試劑盒需使用55℃水浴，請?zhí)崆白骱脺?zhǔn)備。
6.除特別說明外，每次Vortex應(yīng)控制在5-10秒左右。
7.本試劑盒所有操作均在室溫進行，操作時無需冰浴。所有離心也均在室溫進行。
8.廢液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丟棄。
9.參考使用說明，從某些樣品中抽提總DNA不需要使用樣品裂解液A。

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