北京百奧萊博供應(yīng)的抗凝全血基因組DNA提取試劑盒（用于科學(xué)研究，我公司的抗凝全血基因組DNA提取試劑盒（品質(zhì)上佳，經(jīng)過(guò)多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購(gòu)。...

特別提示：包括抗凝全血基因組DNA提取試劑盒（0.1-20ml血液)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：抗凝全血基因組DNA提取試劑盒（0.1-20ml血液)
英文名稱：Extraction kit for genomic DNA from Blood anticoagulated
產(chǎn)品貨號(hào)：WH0013
產(chǎn)品規(guī)格：50mL血|200mL血

本試劑盒采用獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng)，提取0.1-20ml加入各種抗凝劑的新鮮血液和凍存血液樣品基因組DNA。本緩沖液系統(tǒng)可zuì大限度去除蛋白、色素、脂類及其他抑制性雜質(zhì)污染。提取的基因組DNA片段大，產(chǎn)量高，純度好，穩(wěn)定可靠。本試劑盒避免使用苯酚、氯f(wàn)ǎng等有機(jī)溶劑，回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作，如酶切、PCR、文庫(kù)構(gòu)建、Southern雜交等實(shí)驗(yàn)。

提取得率：（根據(jù)血液樣品中白細(xì)胞數(shù)量的不同，DNA產(chǎn)量有所差異）

材料	保存時(shí)間	提取量	DNA產(chǎn)量	OD260/OD280
人類全血	4℃一周	300μl	3-10μg	1.7-1.9
人類全血	4℃一周	1 ml	4-30 μg	1.7-1.9
人類全血	4℃一周	5 ml	100-200 μg	1.7-1.9
人類全血	4℃一周	10 ml	200-400 μg	1.7-1.9

試劑盒組成：

組分	5ml血量	200ml血量
細(xì)胞裂解液CL	125 ml	2×250 ml
緩沖液FG	30 ml	120ml
洗脫緩沖液TB	30 ml	60 ml
Proteinase K	250 μl	1 ml

保存條件：室溫（15-25℃）干燥條件下，可保存12個(gè)月，更長(zhǎng)時(shí)間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應(yīng)將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時(shí)間，必要時(shí)可在37℃水浴中預(yù)熱10min，以溶解沉淀。

注意事項(xiàng)：（請(qǐng)務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng))
1．血液樣品反復(fù)凍融，會(huì)導(dǎo)致提取的DNA片段較小、且提取量下降。所得基因組DNA也應(yīng)盡可能避免反復(fù)凍融，以免斷裂。
2．血液樣品的儲(chǔ)存：
  a)短期保存：已加入抗凝劑的血液樣品可在2-8℃儲(chǔ)存zuì多10天，對(duì)于某些實(shí)驗(yàn)例如Southern雜交等，需要得到完整全長(zhǎng)的基因組DNA，請(qǐng)將血液樣品在2-8℃儲(chǔ)存不超過(guò)3天，此時(shí)基因組DNA的降解程度較輕。
  b)長(zhǎng)期保存：已加入抗凝劑的血液請(qǐng)置于-70℃保存（如果提取的是高分子量的DNA，推薦使用EDTA作為抗凝劑）
3．所有離心操作均可在室溫下完成。

使用方法：

一、小體積全血操作流程（<600 μl血樣；以300μl血液處理量為例）
1．向300μl抗凝劑的血液中加入750 μl細(xì)胞裂解液CL，顛倒混勻5次。
  注意：為方便與離心機(jī)配套使用，可加入與血液等體積的細(xì)胞裂解液CL,重復(fù)裂解兩次。
2．12000rpm（~13400×g)離心1 min。倒棄上清，將離心管倒置在干凈的吸水紙上停留2 min，確保沉淀在管中（此步驟應(yīng)小心操作，為避免沉淀被倒出，推薦使用尖底離心管）。
  注意：在少的情況下沉淀可能會(huì)很松弛，所以要緩慢倒上清，將離心管倒置在吸水紙上是為了減少管壁上清的回流。
3．按照表1配制緩沖液FG與Proteinase K的混合液。
  注意：此混合液zuì好現(xiàn)用現(xiàn)配，并在配好后1h之內(nèi)用完。
4．加入150 μl緩沖液FG與Proteinase K的混合液，立即渦旋混勻至溶液無(wú)團(tuán)塊。
  注意：當(dāng)處理多個(gè)樣品時(shí)，加入緩沖液FG和Proteinase K的混合液后要立刻渦旋混勻，不要等所有的樣品加完后再渦旋振蕩。通常渦旋混勻5sec就足以混勻沉淀，但是有可能痕量的膠狀沉淀難以混勻，此時(shí)可再次補(bǔ)加緩沖液FG和Proteinase K的混合液（具體補(bǔ)加量見表1），再次渦旋混勻。
5．65℃水浴10min，其間顛倒混勻數(shù)次。
  注意：隨著蛋白的消解，溶液的顏色從紅色變?yōu)辄S綠色。
6．加入150 μl異丙醇，顛倒充分混勻至出現(xiàn)絲狀或簇狀基因組DNA。
  注意：與異丙醇完全混合對(duì)于沉淀DNA非常重要，應(yīng)該仔細(xì)觀察。對(duì)于白細(xì)胞數(shù)目很少的樣品，DNA沉淀可能看不到，此時(shí)應(yīng)該至少顛倒離心管20次確保沉淀完全。
7．12000rpm（~13400×g)離心5 min，倒棄上清。將離心管倒置在干凈的吸水紙上，確保沉淀在管中。
  注意：在少的情況下沉淀可能會(huì)很松弛，所以要緩慢倒上清。如果樣品的白細(xì)胞數(shù)量足夠多，可以看到白色的DNA沉淀。
8．加入150 μl 70%乙醇，渦旋振蕩5 sec，12000rpm（~13400×g)離心2 min，倒棄上清。
9．重復(fù)操作步驟8。
10.將離心管倒置在干凈的吸水紙上停留至少5 min，確保沉淀在管中。
  注意：在少的情況下沉淀可能會(huì)很松弛，所以要緩慢倒上清，將離心管倒置在吸水紙上是為了減少管壁中上清的回流。
11.空氣干燥DNA沉淀直至所有的液體揮發(fā)干凈（至少5 min）。
  注意：乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實(shí)驗(yàn)。但是要避免過(guò)分干燥DNA沉淀，因?yàn)檫^(guò)于干燥的DNA很難溶解。
12.加入200 μl緩沖液TB，低速渦旋5 sec，65℃加熱10min-1h溶解DNA，其間輕彈數(shù)次助溶。
  注意：如果DNA沒(méi)有完全溶解，可室溫過(guò)夜。如果使用少量的緩沖液TB溶解DNA，孵育時(shí)間可能需要延長(zhǎng)。

二、中量全血操作流程（1-10 ml血樣；以5 ml血液處理量為例）
1．向5 ml含抗凝劑的血液中加入5 ml細(xì)胞裂解液CL，顛倒混勻5次，3,600rpm（~2,000×g )離心2 min，倒棄上清；
2．再向其中加入7.5 ml細(xì)胞裂解液CL，顛倒混勻5次，3,600rpm（~2,000×g )離心2 min，倒棄上清，將離心管倒置在干凈的吸水紙上停留2 min，確保沉淀在管中（此步驟應(yīng)小心操作，為避免沉淀被倒出，推薦使用尖底離心管）。
  注意：在少的情況下沉淀可能會(huì)很松弛，所以要緩慢倒上清，將離心管倒置在吸水紙上是為了減少管壁上清的回流。
3．按照表1配制緩沖液FG與Proteinase K的混合液。
  注意：此混合液zuì好現(xiàn)用現(xiàn)配，并在配好后1h之內(nèi)用完。
4．加入2.5 ml緩沖液FG與Proteinase K的混合液，立即渦旋混勻至溶液無(wú)團(tuán)塊。
  注意：當(dāng)處理多個(gè)樣品時(shí)，加入緩沖液FG和Proteinase K的混合液后要立刻渦旋混勻，不要等所有的樣品加完后再渦旋振蕩。通常渦旋混勻5 sec就足以混勻沉淀，但是有可能痕量的膠狀沉淀難以混勻，此時(shí)可再次補(bǔ)加緩沖液FG和Proteinase K的混合液（具體補(bǔ)加量見表1），再次渦旋混勻。
5．65℃水浴10-30 min，其間顛倒混勻數(shù)次。
  注意：隨著蛋白的消解，溶液的顏色從紅色變?yōu)辄S綠色。
6．加入2.5 ml異丙醇，顛倒充分混勻至出現(xiàn)絲狀或簇狀基因組DNA。
  注意：與異丙醇完全混合對(duì)于沉淀DNA非常重要，應(yīng)該仔細(xì)觀察。對(duì)于白細(xì)胞數(shù)目很少的樣品，DNA沉淀可能看不到，此時(shí)應(yīng)該至少顛倒離心管20次確保沉淀完全。
7．3,600rpm（~2,000×g )離心8 min，倒棄上清。將離心管倒置在干凈的吸水紙上，確保沉淀在管中。
  注意：在少的情況下沉淀可能會(huì)很松弛，所以要緩慢倒上清。如果樣品的白細(xì)胞數(shù)量足夠多，可以看到白色的DNA沉淀。
8．加入2.5 ml 70%乙醇，渦旋振蕩5 sec，3,600rpm（~2,000×g )離心3 min，倒棄上清。
9．重復(fù)操作步驟8。
10．將離心管倒置在干凈的吸水紙上停留至少5 min，確保沉淀在管中。
  注意：在少的情況下沉淀可能會(huì)很松弛，所以要緩慢倒上清，將離心管倒置在吸水紙上是為了減少管壁中上清的回流。
11．空氣干燥DNA沉淀直至所有的液體揮發(fā)干凈（至少5 min）。
  注意：乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實(shí)驗(yàn)。但是要避免過(guò)分干燥DNA沉淀，因?yàn)檫^(guò)于干燥的DNA很難溶解。
12．加入500 μl緩沖液TB，低速渦旋5 sec，65℃加熱1h溶解DNA，其間輕彈數(shù)次助溶。
  注意：如果DNA沒(méi)有完全溶解，可室溫振蕩過(guò)夜。如果使用少量的緩沖液TB溶解DNA，孵育時(shí)間可能需要延長(zhǎng)。

三、大量全血操作流程（10-20ml血樣；以10 ml血液處理量為例）
1．處理樣品：
a.離心富集有核細(xì)胞進(jìn)行核酸提?。簩⒀獦?,600rpm（~2,000×g )離心15-20 min，抽棄血漿，取中間白膜層細(xì)胞加入到15 ml離心管中，加入10 ml細(xì)胞裂解液CL，渦旋混勻10 sec，3,600rpm（~2,000×g )離心2 min，倒棄上清。再加入15 ml細(xì)胞裂解液CL，渦旋混勻10 sec，3,600rpm（~2,000×g )離心2 min，倒棄上清。
b.細(xì)胞裂解液CL處理血液標(biāo)本分次富集有核細(xì)胞進(jìn)行核酸提?。涸?5 ml離心管中添加細(xì)胞裂解液CL和血液樣本（比例2.5:1），多次富集進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。
（例10 ml全血處理方式：在兩個(gè)15 ml離心管中分別加入5 ml的全血和10 ml細(xì)胞裂解液CL,顛倒混勻5次，3,600rpm（~2,000×g )離心3 min，倒棄上清；再向其中加入2.5ml細(xì)胞裂解液CL，渦旋混勻10 sec，混合到一支離心管里，3,600rpm（~2,000×g )離心3 min，倒棄上清；進(jìn)行下游操作。）
  注意：細(xì)胞裂解液CL處理步驟應(yīng)小心操作，為避免沉淀被倒出，推薦使用尖底離心管。在少的情況下細(xì)胞裂解液CL處理得到的沉淀可能會(huì)很松弛，所以要緩慢倒上清。
2．按照表1配置緩沖液FG與Proteinase K的混合液（比例100:1），對(duì)于10-20ml的全血標(biāo)本，每個(gè)樣品需要5 ml緩沖液FG與Proteinase K工作液。
  注意：此混合液zuì好現(xiàn)用現(xiàn)配，并在配好后1h之內(nèi)用完。
3．加入5 ml緩沖液FG與Proteinase K的混合液，立即渦旋混勻至溶液無(wú)團(tuán)塊。
  注意：當(dāng)處理多個(gè)樣品時(shí)，加入緩沖液FG和Proteinase K的混合液后要立刻渦旋混勻，不要等所有的樣品加完后再渦旋振蕩。通常渦旋混勻30 sec就足以混勻沉淀，但是有可能痕量的膠狀沉淀難以混勻，此時(shí)可再次補(bǔ)加1 ml緩沖液FG和Proteinase K的混合液，再次渦旋混勻。
4．65℃水浴30 min，其間顛倒混勻數(shù)次。
  注意：隨著蛋白的消解，溶液的顏色從紅色變?yōu)辄S綠色。
5．加入5 ml異丙醇，顛倒充分混勻至出現(xiàn)絲狀或簇狀基因組DNA。
  注意：與異丙醇完全混合對(duì)于沉淀DNA非常重要，應(yīng)該仔細(xì)觀察。應(yīng)該至少顛倒離心管20次確保沉淀完全。
6．離心3,600rpm（~2,000×g )離心10min，倒棄上清。將離心管倒置在干凈的吸水紙上，確保沉淀在管中。
  注意：如果得到的團(tuán)塊過(guò)于松弛，可以延長(zhǎng)離心時(shí)間或者增大離心力。
7．加入5 ml 70%乙醇，渦旋振蕩5 sec，離心3,600rpm（~2,000×g )離心3 min，倒棄上清。
8．重復(fù)操作步驟7。
  注意：如果得到的團(tuán)塊過(guò)于松弛，可以延長(zhǎng)離心時(shí)間或者增大離心力。
9.將離心管倒置在干凈的吸水紙上停留至少5 min，確保沉淀在管中。
  注意：在少的情況下沉淀可能會(huì)很松弛，所以要緩慢倒上清，將離心管倒置在吸水紙上是為了減少管壁中上清的回流。
10.空氣干燥DNA沉淀直至所有的液體揮發(fā)干凈（至少5 min）。
  注意：乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實(shí)驗(yàn)。但是要避免過(guò)分干燥DNA沉淀，因?yàn)檫^(guò)于干燥的DNA很難溶解。
11.加入1 ml緩沖液TB，低速渦旋5 sec，65℃加熱1h溶解DNA，其間輕彈數(shù)次助溶。
  注意：如果DNA沒(méi)有完全溶解，可室溫振蕩過(guò)夜。如果使用少量的緩沖液TB溶解DNA，孵育時(shí)間需要延長(zhǎng)。

附表1：不同體積血液所需各種緩沖液用量（μl)

血液體積（μl)	100	300	1000	3000	5000	10000	20000
細(xì)胞裂解液CL（μl)	250	750	2500	7500	12500	25000	50000
緩沖液FG（μl)	50	150	500	1500	2500	5000	10000
Proteinase K（μl)	0.5	1.5	5	15	25	50	100
異丙醇（μl)	50	150	500	1500	2500	5000	10000
70%乙醇（μl)	50	150	500	1500	2500	5000	10000
緩沖液TB（μl)	100	200	200	300	500	1000	1000
補(bǔ)加緩沖液FG和 Proteinase K（μl)	10	30	100	300	500	1000	1000

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