無內(nèi)毒素質(zhì)粒少量提試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于科研目的，我公司的無內(nèi)毒素質(zhì)粒少量提試劑盒品質(zhì)上佳，經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括無內(nèi)毒素質(zhì)粒少量提試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：無內(nèi)毒素質(zhì)粒少量提試劑盒
英文名稱：Endotoxin-free Plasmid mini Extraction Kit
產(chǎn)品貨號：WH0033
產(chǎn)品規(guī)格：50次

本試劑盒采用獨(dú)特的硅膠膜吸附技術(shù)，專一地結(jié)合質(zhì)粒DNA。同時采用特殊的去內(nèi)毒素系統(tǒng)，可有效的去除內(nèi)毒素、蛋白等雜質(zhì)；整個提取過程僅需1h，方便快捷。質(zhì)粒提取得率與質(zhì)粒拷貝數(shù)、宿主菌的種類和培養(yǎng)條件等因素有關(guān)，每次處理5-15ml過夜培養(yǎng)的細(xì)菌培養(yǎng)液，提取多至70μg的質(zhì)粒DNA。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
·快速高產(chǎn)：1h左右提取5-70μg質(zhì)粒。
·質(zhì)粒純度高：特殊的去內(nèi)毒素體系配合CP4吸附柱特異吸附核酸，內(nèi)毒素含量低。
·應(yīng)用廣泛：適用于酶切、PCR、測序、連接、轉(zhuǎn)化等常規(guī)實(shí)驗(yàn)及基因治療、細(xì)胞顯微注射、基因沉默、轉(zhuǎn)染等高端實(shí)驗(yàn)。

提取實(shí)例：

使用本試劑盒提取不同體積的質(zhì)粒，洗脫體積200μl，低拷貝（pBR322)上樣3μl；高拷貝（pBS)上樣2μl，1%瓊脂糖凝膠，6V/cm，電泳30min。


使用本試劑盒提取pEGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，轉(zhuǎn)染48小時后觀察細(xì)胞狀態(tài)檢測GFP熒光。

質(zhì)粒得率：

質(zhì)粒類型	處理量	得率	質(zhì)粒
高拷貝質(zhì)粒	5～15ml	15μg～70μg	pTZ,pUC,pBS,pTG-T
低拷貝質(zhì)粒	5～15ml	5μg～25μg	pBR322,pACYC及其衍生載體,pSC101 及其衍生載體,SuperCos,pWE15

試劑盒組成：

組分	50T
平衡液BL	30ml
溶液P1	30ml
溶液P2	30ml
溶液P4	30ml
去蛋白液PD	30ml
漂洗液PW	15ml
洗脫緩沖液TB	15ml
RNaseA（10mg/ml)	300μl
過濾柱CS	50個
吸附柱CP4	50個
收集管（2ml)	100個

保存條件：室溫（15-25℃）干燥條件下，可保存12個月；更長時間的保存可置于2-8℃。（注意：當(dāng)?shù)蜏刭A存時，使用前應(yīng)先將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫中放置一段時間，必要時可在37℃水浴中預(yù)熱10min，以平衡溶液溫度）。單獨(dú)包裝的RNaseA在室溫可穩(wěn)定保存12個月以上。加入RNaseA后的溶液P1應(yīng)置于2-8℃保存，可穩(wěn)定保存6個月。

注意事項(xiàng)：（請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng))
1．溶液P1在使用前先加入RNaseA（將試劑盒中提供的RNaseA全部加入），混勻，置于2-8℃保存。
2．次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明先在漂洗液PW中加入無水乙醇。
3．使用前先檢查平衡液BL、溶液P2和P4是否出現(xiàn)渾濁，如有混濁現(xiàn)象，可在37℃水浴中加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。
4．注意不要直接接觸溶液P2和P4，使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子。
5．所有離心步驟均為使用臺式離心機(jī)室溫下進(jìn)行離心，速度為12000rpm （~13400×g )。
6．提取的質(zhì)粒量與細(xì)菌培養(yǎng)濃度、質(zhì)?？截悢?shù)等因素有關(guān)。如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)?；虼笥?0 kb的大質(zhì)粒，應(yīng)加大菌體使用量，同時按比例增加P1、P2、P4的用量，洗脫緩沖液應(yīng)在65-70℃預(yù)熱?？梢赃m當(dāng)?shù)难娱L吸附和洗脫的時間，以增加提取效率。
7．實(shí)驗(yàn)前使用平衡液處理吸附柱，可以zuì大限度激活硅基質(zhì)膜，提高得率。
8．用平衡液處理過的柱子zuì好當(dāng)天使用，放置時間過長會影響效果。

使用方法：

1．柱平衡步驟：向吸附柱CP4中（吸附柱放入收集管中）加入500μl的平衡液BL，12,000rpm （~13400×g )離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。（請使用當(dāng)天處理過的柱子）
2．取5-15ml過夜培養(yǎng)的菌液加入離心管中，12000rpm （~13400×g )離心1 min，盡量吸除上清。
  注意：菌液較多時可以通過幾次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中,菌體量以能夠充分裂解為佳，過多的菌體裂解不充分會降低質(zhì)粒的提取效率。
3．向留有菌體沉淀的離心管中加入500μl溶液P1 （請先檢查是否已加入RNaseA），使用移液器或渦旋振蕩器徹底懸浮細(xì)菌細(xì)胞沉淀。
  注意：請務(wù)必徹底懸浮細(xì)菌沉淀，如果有未徹底混勻的菌塊，會影響裂解，導(dǎo)致提取量和純度偏低。
4．向離心管中加入500μl溶液P2，溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次使菌體充分裂解。
  注意：溫和地混合，不要劇烈震蕩，以免污染基因組DNA。此時菌液應(yīng)變得清亮粘稠，所用時間不應(yīng)超過5 min，以免質(zhì)粒受到破壞。如果未變得清亮，可能由于菌體過多，裂解不徹底，應(yīng)減少菌體量。
5．向離心管中加入500μl溶液P4，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次，充分混勻，此時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀，然后室溫放置10min左右，12000rpm （~13400×g )離心10min，此時在離心管底部形成沉淀。
  注意：P4加入后應(yīng)立即混合，避免產(chǎn)生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀，可再次離心后取上清。
6．將上一步收集的上清液分次加入過濾柱CS（過濾柱放入收集管中），12000rpm（~13400×g )離心2 min，濾液收集在干凈的2 ml離心管中（自備）。
7．向?yàn)V液中加入0.3倍濾液體積的異丙醇（加入異丙醇過多容易導(dǎo)致RNA污染），上下顛倒混勻后轉(zhuǎn)移到吸附柱CP4中（吸附柱放入收集管中）。
  注意：過濾后濾液會損失，根據(jù)損失的不同請加入不同體積的異丙醇。吸附柱CP4的zuì大容積為700 μl，所以需要分次過柱。
8．室溫12000rpm （~13400×g)離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
  注意：將第7步中所得溶液分次過柱，每次均按以上條件操作。
9．向吸附柱CP4中加入500μl去蛋白液PD，12000rpm （~13400×g )離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP4放入收集管中。
10．向吸附柱CP4中加入600 μl漂洗液PW（請先檢查是否已加入無水乙醇），12000rpm（~13400×g )離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP4放入收集管中。
  注意：加入漂洗液PW后，如果室溫靜置2-5 min，有助于更好地去除雜質(zhì)。
11．向吸附柱CP4中加入600 μl漂洗液PW，12000rpm （~13400×g )離心1 min，倒掉收集管中的廢液。
12．將吸附柱CP4重新放回收集管中，12000rpm （~13400×g )離心2 min，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除。
  注意：漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實(shí)驗(yàn)。為確保下游實(shí)驗(yàn)不受殘留乙醇的影響，建議將吸附柱CP4開蓋，置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
13．將吸附柱CP4置于一個干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加100-300 μl洗脫緩沖液TB，室溫放置2 min，12000rpm （~13400×g )離心1 min將質(zhì)粒溶液收集到離心管中。
  注意：為了增加質(zhì)粒的回收效率，可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，重復(fù)步驟13。洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液，應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會降低洗脫效率。洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于100 μl，體積過小影響回收效率。且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。

質(zhì)粒DNA濃度及純度檢測：
1．得到的質(zhì)粒DNA可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測濃度與純度。電泳可能為單一條帶，也可能為2到3條DNA條帶，這主要與提取物培養(yǎng)時間長短、提取時操作劇烈程度等有關(guān)。OD₂₆₀值為1相當(dāng)于大約50 μg/ml雙鏈DNA。
2．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值應(yīng)為1.7–1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低，但并不表示純度低，因?yàn)閜H值和離子存在會影響光吸收值。

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名稱：柱式鼠尾DNA提取試劑盒
貨號：BTN121102
規(guī)格：50次
大鼠和小鼠是重要的生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)材料，鼠尾則是小鼠zuì佳活體樣品，常用于基因型的快速檢測。本試劑盒采用獨(dú)特的酶和緩沖體系，可以快速得高質(zhì)量、高純度的基因組DNA。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 即開即用，不需要自己準(zhǔn)備各種溶液。
2. 簡單快速，zuì快可在60分鐘內(nèi)從0.5 鼠尾中提取到10μg DNA。
3. 柱式法回收，所得DNA 純度高(OD260/280一般在1.7-1.9)。片段大(一般在20 kb以上)、純度高。
4. 安全環(huán)保：無需有機(jī)試劑抽提。
5.可用于后續(xù)的酶切、PCR、Southern雜交、文庫構(gòu)建等實(shí)驗(yàn)。
6. 除鼠尾外，還可用于其他動物組織(心，肝、腎、脾和肌肉等)。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	50ml
蛋白酶K溶液(10mg/mL)	1ml
溶液B	15ml
溶液C	50ml
離心吸附柱(15層膜)	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脫液2.0	10ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運(yùn)輸及保存(蛋白酶K溶液需要低溫運(yùn)輸，-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：
1. 剪取0.5-1cm鼠尾(約15-30mg)，盡量剪短成的1mm左右小段，放入干凈的1.5mL塑料離心管中。若不需要立即使用，可以在液氮中或-80℃長期放置，或-80℃放置數(shù)天。如果是動物心，肝、腎、脾和肌肉等組織，則取30mg左右并充分剪碎。
2. 加入1mL溶液A和20μl蛋白酶K溶液(10mg/mL)，37℃保溫10小時(一般過夜保溫就可以)。也可以放置于65℃金屬浴或水浴中保溫2小時，其間每間隔10分鐘渦旋混勻一次(或用手指用力彈擊離心管底部數(shù)次)以幫助鼠尾酶解。對于老年小鼠鼠尾，可以適當(dāng)增加酶解時間到3-4小時。如果有溫控混合器使反應(yīng)體系始終處于搖晃狀態(tài)，則效果更佳。
3. 加入0.3mL的溶液B和0.2mL的自備氯fǎng，振蕩器上振蕩30秒充分混勻。
4. 12000rpm室溫離心3分鐘，小心將上清轉(zhuǎn)移到新的1.5mL塑料離心管中。
5.在上清液中加入等體積的溶液C，上下顛倒30秒充分混勻。
6. 將混合液分兩次轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。每次是先將0.7-0.8mL混合液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，室溫放置2分鐘，12000rpm室溫1分鐘，棄穿透液。再把剩余的一半上柱，重復(fù)此操作。
7. 將0.7mL通用洗柱液加入到離心吸附柱中，12000rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。
8. 將0.3mL通用洗柱液加入到離心吸附柱中，12000rpm離心半分鐘(此步為第二次洗滌，一般可以省略)。
9. 空甩離心吸附柱半分鐘去除殘留液體。
10. 將離心吸附柱放置在一新的1.5mL塑料離心管中，加入30-50μl DNA 洗脫液2.0。
11. 12000rpm離心1分鐘，管底即為DNA溶液，可立即用于PCR，也可長期保存在－20℃。

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WE0166	無內(nèi)毒素質(zhì)粒中提試劑盒	50次
ALH156	酵母基因組DNA大量提取試劑盒	10次

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