布氏桿菌(BS)單重凝膠PCR檢測試劑盒由專業(yè)試劑供應(yīng)商北京百奧萊博提供，用于科研試驗，我公司專注于動物疫病PCR檢測試劑盒產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的布氏桿菌(BS)單重凝膠PCR檢測試劑盒質(zhì)量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。...

特別提示：包括布氏桿菌(BS)單重凝膠PCR檢測試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：布氏桿菌(BS)單重凝膠PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：SYA574
產(chǎn)品規(guī)格：48次/盒

本試劑盒適合于增菌培養(yǎng)物、疑似病料及組織、血液樣本中布魯氏菌(BS)的特異性檢測，用于布魯氏菌(BS)的輔助診斷，其檢測結(jié)果僅供臨床參考。

本試劑盒用一對布魯氏菌特異性引物，對布魯氏菌DNA進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

試劑盒組成：

組份	數(shù)量	規(guī)格
布魯氏菌PCR反應(yīng)液(BS-PCR MIX)	1管	720μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction)	2管	1.5mL/管
陰性對照(NTC)	1管	50μL/管
陽性對照(BS-PTC)	1管	50μL/管

儲存條件：-20℃以下，有效期6個月。

使用方法：

一、樣品采集：
?血清：用一次性無菌注射器抽取靜脈血2mL，注入無菌的干燥玻璃管，室溫(22-25℃)放置30-60min，血標本可自發(fā)完成凝集析出血清，或直接使用水平離心機，3000rpm離心5min，吸取上層血清，轉(zhuǎn)移至1.5mL滅菌離心管。
?血漿：用一次性無菌注射器抽取靜脈血2mL，注入含EDTA2Na(乙二胺四乙酸二鈉)或檸檬酸鈉抗凝劑的玻璃管，立即輕輕顛倒玻璃管混合5-10次，使抗凝劑與靜脈血充分混勻，5-10min后即可分離出血漿，轉(zhuǎn)移至1.5mL滅菌離心管。
?糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
?病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
 注：上述樣品建議經(jīng)過增菌后，收集培養(yǎng)物用于檢測。

二、DNA提取：
可按常規(guī)方法提取，也可采用商品化DNA試劑盒提取
?培養(yǎng)物：取培養(yǎng)物50μL(培養(yǎng)至一定濁度)或者挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進行PCR反應(yīng)。
?糞便樣品：挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中，加入0.5mL生理鹽水，振蕩混勻，13000rpm離心3分鐘，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應(yīng)。
?其他液體標本：取標本2-3mL，13000rpm離心3min，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應(yīng)。
 注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。

三、檢測步驟：
1．試劑的準備
從試劑盒中取出PCR反應(yīng)液(BS-PCR MIX)，室溫融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑	每個反應(yīng)加入的量	N個反應(yīng)加入的量
PCR反應(yīng)液	15μL	N×15μL

向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μLPCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品/陰性對照(NTC)/陽性對照(BS-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
2．qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實時熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。推薦循環(huán)條件：

預(yù)變性	1循環(huán)	94℃ for 2 min
PCR擴增	35循環(huán)	94℃ for 30 sec 58℃ for 30 sec 72℃ for 30 sec

四、結(jié)果分析：
?稱取1.5g瓊脂糖放于250mL錐形瓶中，加入100mL 1×TAE電泳緩沖液，微波爐加熱溶解，稍冷后加入10μL染色液混勻，倒入插有梳子的制膠板中。
?待膠凝固后，取10μL Maker(推薦使用DL2000 Maker)點樣于左側(cè)凝膠孔中，取10μL PCR產(chǎn)物依次點樣于凝膠孔中，電壓值設(shè)定為電泳槽正負距離(cm)與5(V/cm)的乘積。待溴酚蘭指示劑電泳至凝膠中部時停止電泳并使用凝膠成像儀或紫外透照臺觀察結(jié)果。

試驗成立判定：
?陰性對照(NTC)：無任何的條帶(引物帶除外)。
?陽性對照(BS-PTC)：在260bp處有條帶。
?被檢樣品：在260bp處有條帶為陽性樣品，否則為陰性樣品。
?以上條件應(yīng)同時滿足，否則，此次試驗視為無效。

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